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上海紀寧酶聯(lián)科技有限公司
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更新時間:2017-01-16 22:05:06瀏覽次數(shù):275次
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人胃粘液素(GM)ELISA試劑盒,ELISA試驗以靈敏度較高、特異性較好的特點在酶聯(lián)免疫實驗得到了廣泛的應用,但操作中的各個環(huán)節(jié)對試驗的檢測效果影響較大,如不注意,有可能導致顯色不全、花板等結(jié)果。
人胃粘液素(GM)ELISA試劑盒實驗ELISA結(jié)果判定常用的幾種方法:
1)目測定性法:加入底物經(jīng)酶解和終止反應后,肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競爭法則淺于)陰性對照;與陰性對照的顏色接近者,判定為陰性。
2)以樣品孔的OD值大于陰性對照OD值+2~3SD,作為陽性結(jié)果的閾值。
3)以P/N值(陽性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽性;P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑;P/N小于1.5為陰性。
4)定量測定結(jié)果根據(jù)標準曲線計算樣品中待測物的含量。
我們將在人胃粘液素(GM)ELISA試劑盒操作中各個環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問題的原因及解決辦法總結(jié)于下,以期給客戶帶來一些啟發(fā),提高試驗質(zhì)量。
22980 車前草(車前) 中藥對照藥材 TLC法鑒別 121543-200501 1g
22981 決明子(小決明) 中藥對照藥材 TLC法鑒別 121544-200501 0.5g
22982 綿萆薢 中藥對照藥材 TLC法鑒別 121545-200501 2g
22983 黃根 中藥對照藥材 TLC法鑒別 121546-200501 5g
22984 藤合歡 中藥對照藥材 TLC法鑒別 121547-200501 1g
22985 川射干 中藥對照藥材 TLC法鑒別 121548-200501 1g
22986 合歡皮 中藥對照藥材 TLC法鑒別 121549-200501 1g
22987 草果 中藥對照藥材 TLC法鑒別 121550-200501 2g
22988 * 標準品 效價測定 0303-9613 500mg
22989 * 標準品 效價測定 130305-200519 200mg
22990 四環(huán)素 標準品 效價測定 130306-200317 200mg
22991 * 標準品 效價測定 130307-200215 200mg
22992 * 標準品 效價測定 0308-200012 200mg
22993 * 標準品 效價測定 0309-9310 200mg
22994 * 標準品 效價測定 0313-9809 100mg
22995 * 標準品 效價測定 0319-9209 500mg
22996 * 標準品 效價測定 130320-200408 100mg
22997 * 標準品 效價測定 130326-200314 200mg
22998 粘菌素 標準品 效價測定 130327-200305 200mg
22999 *SV 標準品 效價測定 0333-200006 100mg
23000 * 標準品 效價測定 130335-200204 200mg
23001 * 標準品 效價測定 0337-9803 200mg
23002 去甲* 標準品 效價測定 130338-200303 150mg
23003 卷曲霉素 標準品 效價測定 0339-9802 200mg
23004 * 標準品 效價測定 0340-200002 200mg
23005 * 標準品 效價測定 0341-9402 400mg
23006 * 標準品 效價測定 0342-9402 200mg
23007 * 標準品 效價測定 0344-9101 300mg
23008 乙酰* 標準品 效價測定 130347-200403 200mg
23009 * 標準品 效價測定 0348-9301 200mg
23010 * 標準品 效價測定 0350-200001 200mg
23011 羅* 標準品 效價測定 130351-200303 200mg
23012 * 標準品 效價測定 130352-200405 200mg
23013 西梭米星 標準品 效價測定 0353-200001 150mg
23014 * 標準品 效價測定 0354-200001 200mg
23015 奈替米星 標準品 效價測定 0355-200001 200mg
23016 * 標準品 效價測定 130356-200403 200mg
23017 吉它霉素 標準品 效價測定及組分測定 0357-9901 200mg
23018 * 標準品 效價測定 130359-200301 100mg
23019 * 標準品 效價測定 130360-200301 100mg
23020 丙酸* 標準品 效價測定 130361-200301 100mg
23021 醋酸* 標準品 效價測定 130362-200301 100mg
23022 依替米星 標準品 效價測定 130365-200301 200mg
23023 * 標準品 效價測定 130371-200305 200mg
23024 乙酰吉它霉素 標準品 效價測定 130372-200301 200mg
23025 4-差向四環(huán)素 對照品 檢查 130401-200209 50mg
23026 脫水四環(huán)素 對照品 檢查 130402-200203 50mg
23027 脫水差向四環(huán)素 對照品 檢查 130403-200204 50mg
23028 4-差向* 對照品 檢查 130404-200209 50mg
23029 β-* 對照品 雜質(zhì)檢查 130405-200405 50mg
23030 * 對照品 含量測定人胃粘液素(GM)ELISA試劑盒 130407-200306 150mg
23031 * 對照品 含量測定 130408-200209 200mg
23032 * 對照品 含量測定 130409-200208 200mg
23033 * 對照品 含量測定 130410-200405 100mg
下面我們分析Elisa試驗操作中可能影響結(jié)果的原因,并給出相應的解決辦法:
1 選擇試劑:選擇質(zhì)量優(yōu)良的檢測試劑,嚴格按照試劑說明書進行操作,操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
2 加樣:可能原因:
1)血清或血漿標本分離不好即進行加樣;
2)手工操作中,加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時間過長(特別是室內(nèi)溫度較高時); 3)加完標本再加酶試劑時酶濺出孔外。
解決辦法:
1) 標本為血清:將血液先自然存放1-2小時后,再用3000rmp離心15分鐘;標本為血漿:必須使用含抗凝劑的血液標本收集管,采血后必須立即顛倒*混合5-10次,放置一段時間后,3000rpm離心15分鐘;若在幾天內(nèi)檢測,可放在2-8℃冰箱中,若要貯存,則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。
2) 加樣后及時放入孵箱。
3) 加酶試劑后用吸水紙在酶標板表面輕拭吸干。
4) 如果采用AT或其他全自動加樣,選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。
5) 標本較多時,請分批操作。
3 孵育:可能原因:
1) 孵育時未貼封片或加蓋,使標本或稀釋液蒸發(fā),吸附于孔壁,難于清洗*;
2) 孵育時間人為延長,導致非特異性結(jié)合緊附于反應孔周圍,難以清洗*。解決辦法:
1) 貼封片或加蓋;
2) 按說明步驟嚴格控制操作時間。
4 洗板:可能原因:
1) 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。
2) 采用半自動洗板機洗板時,洗液量不足,導致洗板不*;洗板針堵塞,抽吸不*;洗板不暢,導致洗板效果差。
3) 反應板過多造成洗板等待時間長。 解決辦法:
1) 保證洗液注滿各孔,洗板針暢通,洗完板后在吸水紙(選擇干凈、無或少塵的吸水材料)上輕輕拍干;
2) 合理安排,或多用幾臺洗板機。
5人胃粘液素(GM)ELISA試劑盒顯色:可能原因:
1) 顯色劑配制后放置時間過長或使用過期顯色劑;
2) 加顯色劑時濺出孔外造成液體回流。解決辦法:
1) 顯色劑盡量在臨用前配制,堅持不用過期顯色劑,肉眼可見淺藍色的TMB顯色劑不用; 2) 加樣時保持顯色劑不外流;
3) A、B液應避免接觸金屬器械。
6 終止:可能原因如加終止液時產(chǎn)生較多氣泡,導致假陽性增加。所以在加終止液時應避免產(chǎn)生氣泡。
7 讀板:如讀板時板底不清潔等。應保證酶標板清潔。
所以在整個操作過程中保證酶標板不接觸次氯酸; 盡可能實現(xiàn)ELISA檢測標準自動化,有效提高檢測質(zhì)量。
在實際操作中,除了選擇優(yōu)良試劑外,必須嚴格按照操作步驟進行操作,同時作好室內(nèi)質(zhì)控、室間質(zhì)評,以嚴謹?shù)墓ぷ髯黠L檢測每一份標本,才能保證檢測質(zhì)量。現(xiàn)在國內(nèi)已有相當數(shù)量的單位擁有全自動酶標儀,這對于實現(xiàn)ELISA標準化檢測、提高檢測質(zhì)量起到了重要作用。
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