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上海紀寧酶聯(lián)科技有限公司
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更新時間:2017-02-22 22:47:20瀏覽次數(shù):139次
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人*脫氫酶(GDH/GLDH)ELISA試劑盒,ELISA試驗以靈敏度較高、特異性較好的特點在酶聯(lián)免疫實驗得到了廣泛的應(yīng)用,但操作中的各個環(huán)節(jié)對試驗的檢測效果影響較大,如不注意,有可能導致顯色不全、花板等結(jié)果。
人*脫氫酶(GDH/GLDH)ELISA試劑盒實驗ELISA結(jié)果判定常用的幾種方法:
1)目測定性法:加入底物經(jīng)酶解和終止反應(yīng)后,肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競爭法則淺于)陰性對照;與陰性對照的顏色接近者,判定為陰性。
2)以樣品孔的OD值大于陰性對照OD值+2~3SD,作為陽性結(jié)果的閾值。
3)以P/N值(陽性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽性;P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑;P/N小于1.5為陰性。
4)定量測定結(jié)果根據(jù)標準曲線計算樣品中待測物的含量。
我們將在人*脫氫酶(GDH/GLDH)ELISA試劑盒操作中各個環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問題的原因及解決辦法總結(jié)于下,以期給客戶帶來一些啟發(fā),提高試驗質(zhì)量。
22762 石椒草 中藥對照藥材 TLC法鑒別 121294-200402 1.0g
22763 薯莨 中藥對照藥材 TLC法鑒別 121295-0301 0.2g
22764 蒺藜 中藥對照藥材 TLC法鑒別 121296-200402 3.0g
22765 石吊蘭 中藥對照藥材 TLC法鑒別 121297-200402 2.0g
22766 隔山消 中藥對照藥材 TLC法鑒別 121298-200402 1.0g
22767 大果木姜子 中藥對照藥材 TLC法鑒別 121300-0301 0.5g
22768 羊奶奶葉 中藥對照藥材 TLC法鑒別 121301-200502 5.0g
22769 見血飛 中藥對照藥材 TLC法鑒別 121302-200502 1.0g
22770 甘草(脹果甘草) 中藥對照藥材 TLC法鑒別 121303-200502 1.3g
22771 莪術(shù)(溫郁金) 中藥對照藥材 TLC法鑒別 121304-200301 1.0g
22772 結(jié)石草 中藥對照藥材 TLC法鑒別 121305-200301 2.0g
22773 紫色姜 中藥對照藥材 TLC法鑒別 121306-200301 0.5g
22774 寬葉纈草 中藥對照藥材 TLC法鑒別 121307-200301 1.0g
22775 薄芝菌絲體粉 中藥對照藥材 TLC法鑒別 121308-200301 2.0g
22776 馬蘭草 中藥對照藥材 TLC法鑒別 121309-200402 2.0g
22777 紫檀香 中藥對照藥材 TLC法鑒別 121310-200301 0.5g
22778 絞股藍 中藥對照藥材 TLC法鑒別 121311-200402 2.0g
22779 鳳尾草 中藥對照藥材 TLC法鑒別 121312-200301 1.0g
22780 鐵筷子 中藥對照藥材 TLC法鑒別 121313-200503 2.0g
22781 吉祥草 中藥對照藥材 TLC法鑒別 121314-200503 2.0g
22782 地瓜藤 中藥對照藥材 TLC法鑒別 121315-200502 1.0g
22783 白英 中藥對照藥材 TLC法鑒別 121316-200502 5.0g
22784 苦菜子 中藥對照藥材 TLC法鑒別 121317-200502 2.0g
22785 桃金娘根 中藥對照藥材 TLC法鑒別 121318-200402 2.0g
22786 珠子草 中藥對照藥材 TLC法鑒別 121319-200301 0.5g
22787 烏賊墨 中藥對照藥材 TLC法鑒別 121320-200301 0.5g
22788 黃芫花 中藥對照藥材 TLC法鑒別 121321-200301 1.0g
22789 荷葉 中藥對照藥材 TLC法鑒別 121322-200402 1.0g
22790 蜂膠 中藥對照藥材 TLC法鑒別 121324-200301 0.5g
22791 冬凌草 中藥對照藥材 TLC法鑒別 121325-200301 1.0g
22792 腎茶 中藥對照藥材 TLC法鑒別 121326-200502 2.0g
22793 金鐵鎖 中藥對照藥材 TLC法鑒別 121327-200402 1.0g
22794 牛黃 中藥對照藥材 TLC法鑒別 121328-200301 10mg
22795 八角楓 中藥對照藥材 TLC法鑒別 121329-200502 10g
22796 狼毒(狼毒大戟) 中藥對照藥材 TLC法鑒別 121331-200402 4.0g
22797 塞隆骨 中藥對照藥材 TLC法鑒別 121332-200502 2.0g
22798 廣棗 中藥對照藥材 TLC法鑒別 121334-200401 1.0g
22799 鷓鴣菜 中藥對照藥材 TLC法鑒別 121335-200401 1.0g
22800 膽木 中藥對照藥材 TLC法鑒別 121336-200401 25.0g
22801 珊瑚姜 中藥對照藥材 TLC法鑒別 121337-200401 0.5g
22802 草烏 中藥對照藥材 TLC法鑒別 121338-200401 0.6g
22803 黑芝麻 中藥對照藥材 TLC法鑒別 121339-200401 1.0g
22804 山楂葉(山里紅) 中藥對照藥材 TLC法鑒別 121340-200401 3.0g
22805 黃精(黃精) 中藥對照藥材 TLC法鑒別 121341-200402 1.0g
22806 竹葉柴胡 中藥對照藥材 TLC法鑒別 121343-200401 5.0g
22807 綠萍 中藥對照藥材 TLC法鑒別 121344-200401 2.0g
22808 艾葉 中藥對照藥材 TLC法鑒別 121345-200401 1.0g
22809 鴨膽子 中藥對照藥材 TLC法鑒別 121346-200401 1.0g
22810 杏葉防風 中藥對照藥材 TLC法鑒別 121347-200401 6.0g
22811 五靈脂 中藥對照藥材 TLC法鑒別 121348-200501 1.0g
22812 水防風 中藥對照藥材 TLC法鑒別 121349-200401 1.0g
22813 固公果根 中藥對照藥材 TLC法鑒別 121350-200401 2.0g
22814 膏桐 中藥對照藥材人*脫氫酶(GDH/GLDH)ELISA試劑盒 TLC法鑒別 121352-200401 2.0g
22815 大血藤 中藥對照藥材 TLC法鑒別 121353-200401 2.0g
22816 川西獐牙菜 中藥對照藥材 TLC法鑒別 121354-200401 1.0g
下面我們分析Elisa試驗操作中可能影響結(jié)果的原因,并給出相應(yīng)的解決辦法:
1 選擇試劑:選擇質(zhì)量優(yōu)良的檢測試劑,嚴格按照試劑說明書進行操作,操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
2 加樣:可能原因:
1)血清或血漿標本分離不好即進行加樣;
2)手工操作中,加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時間過長(特別是室內(nèi)溫度較高時); 3)加完標本再加酶試劑時酶濺出孔外。
解決辦法:
1) 標本為血清:將血液先自然存放1-2小時后,再用3000rmp離心15分鐘;標本為血漿:必須使用含抗凝劑的血液標本收集管,采血后必須立即顛倒*混合5-10次,放置一段時間后,3000rpm離心15分鐘;若在幾天內(nèi)檢測,可放在2-8℃冰箱中,若要貯存,則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。
2) 加樣后及時放入孵箱。
3) 加酶試劑后用吸水紙在酶標板表面輕拭吸干。
4) 如果采用AT或其他全自動加樣,選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。
5) 標本較多時,請分批操作。
3 孵育:可能原因:
1) 孵育時未貼封片或加蓋,使標本或稀釋液蒸發(fā),吸附于孔壁,難于清洗*;
2) 孵育時間人為延長,導致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周圍,難以清洗*。解決辦法:
1) 貼封片或加蓋;
2) 按說明步驟嚴格控制操作時間。
4 洗板:可能原因:
1) 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。
2) 采用半自動洗板機洗板時,洗液量不足,導致洗板不*;洗板針堵塞,抽吸不*;洗板不暢,導致洗板效果差。
3) 反應(yīng)板過多造成洗板等待時間長。 解決辦法:
1) 保證洗液注滿各孔,洗板針暢通,洗完板后在吸水紙(選擇干凈、無或少塵的吸水材料)上輕輕拍干;
2) 合理安排,或多用幾臺洗板機。
5人*脫氫酶(GDH/GLDH)ELISA試劑盒顯色:可能原因:
1) 顯色劑配制后放置時間過長或使用過期顯色劑;
2) 加顯色劑時濺出孔外造成液體回流。解決辦法:
1) 顯色劑盡量在臨用前配制,堅持不用過期顯色劑,肉眼可見淺藍色的TMB顯色劑不用; 2) 加樣時保持顯色劑不外流;
3) A、B液應(yīng)避免接觸金屬器械。
6 終止:可能原因如加終止液時產(chǎn)生較多氣泡,導致假陽性增加。所以在加終止液時應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡。
7 讀板:如讀板時板底不清潔等。應(yīng)保證酶標板清潔。
所以在整個操作過程中保證酶標板不接觸次氯酸; 盡可能實現(xiàn)ELISA檢測標準自動化,有效提高檢測質(zhì)量。
在實際操作中,除了選擇優(yōu)良試劑外,必須嚴格按照操作步驟進行操作,同時作好室內(nèi)質(zhì)控、室間質(zhì)評,以嚴謹?shù)墓ぷ髯黠L檢測每一份標本,才能保證檢測質(zhì)量?,F(xiàn)在國內(nèi)已有相當數(shù)量的單位擁有全自動酶標儀,這對于實現(xiàn)ELISA標準化檢測、提高檢測質(zhì)量起到了重要作用。
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