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上海紀(jì)寧酶聯(lián)科技有限公司
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人抑瘤素M(OSM)ELISA試劑盒,ELISA試驗(yàn)以靈敏度較高、特異性較好的特點(diǎn)在酶聯(lián)免疫實(shí)驗(yàn)得到了廣泛的應(yīng)用,但操作中的各個(gè)環(huán)節(jié)對(duì)試驗(yàn)的檢測(cè)效果影響較大,如不注意,有可能導(dǎo)致顯色不全、花板等結(jié)果。
人抑瘤素M(OSM)ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)ELISA結(jié)果判定常用的幾種方法:
1)目測(cè)定性法:加入底物經(jīng)酶解和終止反應(yīng)后,肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競(jìng)爭(zhēng)法則淺于)陰性對(duì)照;與陰性對(duì)照的顏色接近者,判定為陰性。
2)以樣品孔的OD值大于陰性對(duì)照OD值+2~3SD,作為陽性結(jié)果的閾值。
3)以P/N值(陽性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽性;P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑;P/N小于1.5為陰性。
4)定量測(cè)定結(jié)果根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中待測(cè)物的含量。
我們將在人抑瘤素M(OSM)ELISA試劑盒操作中各個(gè)環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問題的原因及解決辦法總結(jié)于下,以期給客戶帶來一些啟發(fā),提高試驗(yàn)質(zhì)量。
22220 白藜蘆醇 對(duì)照品 含量測(cè)定 111535-200502 20mg
22221 土貝母苷甲 對(duì)照品 鑒別 111536-200304 20mg
22222 松脂醇二葡萄糖苷 對(duì)照品 含量測(cè)定 111537-200501 20mg
22223 槲皮苷 對(duì)照品 含量測(cè)定 111538-200403 20mg
22224 *元 對(duì)照品 含量測(cè)定 111539-200001 20mg
22225 反丁烯二酸(富馬酸) 對(duì)照品 鑒別 111541-200001 20mg
22226 荊芥油 對(duì)照品 鑒別 111542-200001 0.2ml
22227 生姜油 對(duì)照品 鑒別 111543-200002 0.2ml
22228 * 對(duì)照品 鑒別 111544-200202 0.2ml
22229 * 對(duì)照品 鑒別 111545-200202 0.2ml
22230 魚腥草油 對(duì)照品 鑒別 111546-200301 0.2ml
22231 牡荊油 對(duì)照品 鑒別 111547-200502 0.2ml
22232 小茴香油 對(duì)照品 鑒別 111548-200202 0.2ml
22233 紫蘇油 對(duì)照品 鑒別 111549-200101 0.2ml
22234 * 對(duì)照品 鑒別 111550-200001 0.2ml
22235 * 對(duì)照品 鑒別 111551-200101 0.5ml
22236 * 對(duì)照品 鑒別 111553-200201 50mg
22237 蔓荊子黃素 對(duì)照品 含量測(cè)定 111554-200503 20mg
22238 * 對(duì)照品 含量測(cè)定 111555-200101 20mg
22239 茴香醚 對(duì)照品 鑒別 111556-200402 0.2ml
22240 次野鳶尾黃素 對(duì)照品 含量測(cè)定 111557-200101 20mg
22241 龍血素B 對(duì)照品 含量測(cè)定 111558-200303 20mg
22242 劍葉龍血素C 對(duì)照品 鑒別 111559-200302 20mg
22243 金利油 對(duì)照品 鑒別 111560-200303 1ml
22244 辛夷脂素 對(duì)照品 含量測(cè)定 111561-200402 20mg
22245 丹酚酸B 對(duì)照品 含量測(cè)定 111562-200403 20mg
22246 荷葉堿 對(duì)照品 含量測(cè)定 111566-200402 20mg
22247 *甲素(*內(nèi)酯醇) 對(duì)照品 含量測(cè)定-TLC掃描法 111567-200502 20mg
22248 *醚內(nèi)酯 對(duì)照品 含量測(cè)定 111568-200502 20mg
22249 異鼠李素-3-O-新* 對(duì)照品 含量測(cè)定 111571-200503 20mg
22250 遠(yuǎn)志皂苷元 對(duì)照品 含量測(cè)定 111572-200502 20mg
22251 香蒲新苷 對(duì)照品 鑒別 111573-200503 20mg
22252 紫丁香苷 對(duì)照品 含量測(cè)定 111574-200502 20mg
22253 虎杖苷 對(duì)照品 含量測(cè)定 111575-200502 20mg
22254 L-* 對(duì)照品 鑒別 111576-200201 100mg
22255 * 對(duì)照品 鑒別 111577-200201 100mg
22256 L-羥* 對(duì)照品 含量測(cè)定 111578-200201 50mg
22257 降香揮發(fā)油 對(duì)照品 鑒別 111579-200201 0.2ml
22258 甲基* 對(duì)照品 UV法含量測(cè)定 111580-200503 20mg
22259 紫菀酮 對(duì)照品 含量測(cè)定 111581-200403 20mg
22260 青陽參苷元 對(duì)照品 含量測(cè)定 111582-200201 20mg
22261 二氫歐山芹醇當(dāng)歸酸酯 對(duì)照品 含量測(cè)定 111583-200301 20mg
22262 西紅花苷-I 對(duì)照品 111588-200501 20mg
22263 西紅花苷-II 對(duì)照品 111589- 20mg
22264 重樓皂苷 I 對(duì)照品 含量測(cè)定 111590-200402 20mg
22265 重樓皂苷Ⅱ 對(duì)照品 含量測(cè)定 111591-200402 20mg
22266 重樓皂苷 Ⅵ 對(duì)照品 含量測(cè)定 111592-200402 20mg
22267 重樓皂苷 Ⅶ 對(duì)照品 含量測(cè)定 111593-200402 20mg
22268 總銀杏酸 對(duì)照品 鑒別 111594-200501 30mg
22269 黃芩素 對(duì)照品 含量測(cè)定用 111595-200402 20mg
22270 胡黃連苷-Ⅱ 對(duì)照品人抑瘤素M(OSM)ELISA試劑盒 含量測(cè)定 111596-200402 20mg
22271 *酯甲 對(duì)照品 TLC-UV法含量測(cè)定 111597-200503 20mg
22272 脫水*內(nèi)酯琥珀酸半酯 對(duì)照品 含量測(cè)定 111598-200502 20mg
22273 丹參酮ⅡA磺酸鈉 對(duì)照品 鑒別 111605-200301 50mg
下面我們分析Elisa試驗(yàn)操作中可能影響結(jié)果的原因,并給出相應(yīng)的解決辦法:
1 選擇試劑:選擇質(zhì)量?jī)?yōu)良的檢測(cè)試劑,嚴(yán)格按照試劑說明書進(jìn)行操作,操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
2 加樣:可能原因:
1)血清或血漿標(biāo)本分離不好即進(jìn)行加樣;
2)手工操作中,加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時(shí)間過長(zhǎng)(特別是室內(nèi)溫度較高時(shí)); 3)加完標(biāo)本再加酶試劑時(shí)酶濺出孔外。
解決辦法:
1) 標(biāo)本為血清:將血液先自然存放1-2小時(shí)后,再用3000rmp離心15分鐘;標(biāo)本為血漿:必須使用含抗凝劑的血液標(biāo)本收集管,采血后必須立即顛倒*混合5-10次,放置一段時(shí)間后,3000rpm離心15分鐘;若在幾天內(nèi)檢測(cè),可放在2-8℃冰箱中,若要貯存,則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。
2) 加樣后及時(shí)放入孵箱。
3) 加酶試劑后用吸水紙?jiān)诿笜?biāo)板表面輕拭吸干。
4) 如果采用AT或其他全自動(dòng)加樣,選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。
5) 標(biāo)本較多時(shí),請(qǐng)分批操作。
3 孵育:可能原因:
1) 孵育時(shí)未貼封片或加蓋,使標(biāo)本或稀釋液蒸發(fā),吸附于孔壁,難于清洗*;
2) 孵育時(shí)間人為延長(zhǎng),導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周圍,難以清洗*。解決辦法:
1) 貼封片或加蓋;
2) 按說明步驟嚴(yán)格控制操作時(shí)間。
4 洗板:可能原因:
1) 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。
2) 采用半自動(dòng)洗板機(jī)洗板時(shí),洗液量不足,導(dǎo)致洗板不*;洗板針堵塞,抽吸不*;洗板不暢,導(dǎo)致洗板效果差。
3) 反應(yīng)板過多造成洗板等待時(shí)間長(zhǎng)。 解決辦法:
1) 保證洗液注滿各孔,洗板針暢通,洗完板后在吸水紙(選擇干凈、無或少塵的吸水材料)上輕輕拍干;
2) 合理安排,或多用幾臺(tái)洗板機(jī)。
5人抑瘤素M(OSM)ELISA試劑盒顯色:可能原因:
1) 顯色劑配制后放置時(shí)間過長(zhǎng)或使用過期顯色劑;
2) 加顯色劑時(shí)濺出孔外造成液體回流。解決辦法:
1) 顯色劑盡量在臨用前配制,堅(jiān)持不用過期顯色劑,肉眼可見淺藍(lán)色的TMB顯色劑不用; 2) 加樣時(shí)保持顯色劑不外流;
3) A、B液應(yīng)避免接觸金屬器械。
6 終止:可能原因如加終止液時(shí)產(chǎn)生較多氣泡,導(dǎo)致假陽性增加。所以在加終止液時(shí)應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡。
7 讀板:如讀板時(shí)板底不清潔等。應(yīng)保證酶標(biāo)板清潔。
所以在整個(gè)操作過程中保證酶標(biāo)板不接觸次氯酸; 盡可能實(shí)現(xiàn)ELISA檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)自動(dòng)化,有效提高檢測(cè)質(zhì)量。
在實(shí)際操作中,除了選擇優(yōu)良試劑外,必須嚴(yán)格按照操作步驟進(jìn)行操作,同時(shí)作好室內(nèi)質(zhì)控、室間質(zhì)評(píng),以嚴(yán)謹(jǐn)?shù)墓ぷ髯黠L(fēng)檢測(cè)每一份標(biāo)本,才能保證檢測(cè)質(zhì)量?,F(xiàn)在國(guó)內(nèi)已有相當(dāng)數(shù)量的單位擁有全自動(dòng)酶標(biāo)儀,這對(duì)于實(shí)現(xiàn)ELISA標(biāo)準(zhǔn)化檢測(cè)、提高檢測(cè)質(zhì)量起到了重要作用。
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