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上海紀(jì)寧酶聯(lián)科技有限公司
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更新時間:2017-01-14 08:08:03瀏覽次數(shù):337次
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人胃癌標(biāo)志物ELISA試劑盒,ELISA試驗以靈敏度較高、特異性較好的特點在酶聯(lián)免疫實驗得到了廣泛的應(yīng)用,但操作中的各個環(huán)節(jié)對試驗的檢測效果影響較大,如不注意,有可能導(dǎo)致顯色不全、花板等結(jié)果。
人胃癌標(biāo)志物ELISA試劑盒實驗ELISA結(jié)果判定常用的幾種方法:
1)目測定性法:加入底物經(jīng)酶解和終止反應(yīng)后,肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競爭法則淺于)陰性對照;與陰性對照的顏色接近者,判定為陰性。
2)以樣品孔的OD值大于陰性對照OD值+2~3SD,作為陽性結(jié)果的閾值。
3)以P/N值(陽性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽性;P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑;P/N小于1.5為陰性。
4)定量測定結(jié)果根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中待測物的含量。
我們將在人胃癌標(biāo)志物ELISA試劑盒操作中各個環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問題的原因及解決辦法總結(jié)于下,以期給客戶帶來一些啟發(fā),提高試驗質(zhì)量。
21734 聯(lián)苯芐醇 對照品 檢查 100327-200201 50mg
21735 *鈉 對照品 含量測定 100330-200101 50mg
21736 * 對照品 檢查 100331-200001 50mg
21737 * 對照品 檢查 10332-0001 50mg
21738 * 對照品 含量測定 100333-200201 50mg
21739 * 對照品 HPLC法含量測定用 100334-200302 100mg
21740 * 對照品 檢查 100335-200001 50mg
21741 * 對照品 HPLC/UV法含量測定 100336-200402 100mg
21742 * 對照品 含量測定 100337-200502 100mg
21743 * 對照品 檢查 10338-0001 50mg
21744 *雜質(zhì)A 對照品 檢查 10339-0001 20mg
21745 *雜質(zhì)B 對照品 檢查 10340-0001 20mg
21746 鹽酸* 對照品 含量測定 100341-200301 250mg
21747 * 對照品 含量測定 100342-200402 50mg
21748 鹽酸妥拉唑林 對照品 含量測定 100343-200201 50mg
21749 鹽酸硫利達(dá)嗪 對照品 鑒別 100344-200001 50mg
21750 鹽酸卡替洛爾 對照品 鑒別 100345-200301 75mg
21751 * 對照品 含量測定 100346-200402 100mg
21752 * 對照品 含量測定 100347-200301 50mg
21753 7-甲氧基-4'-羥基異黃酮 對照品 HPLC法有關(guān)物質(zhì)檢查用 100348-200301 20mg
21754 * 對照品 含量測定(HPLC) 100349-200501 100mg
21755 * 對照品 HPLC法含量測定 100350-200501 100mg
21756 * 對照品 原子吸收法溶出度檢查 100351-200301 100mg
21757 * 對照品 含量測定 100352-200301 50mg
21758 * 對照品 UV法含量測定用 100353-200301 50mg
21759 *(*占替諾) 對照品 UV法含量測定 100356-200401 100mg
21760 鹽酸* 對照品 含量測定(HPLC) 100357-200301 100mg
21761 卡巴* 對照品 UV法含量測定用 100361-200301 30mg
21762 * 對照品 含量測定 100363-200301 50mg
21763 * 對照品 HPLC法含量測定用 100364-200301 50mg
21764 * 對照品 HPLC法含量測定 100365-200401 100mg
21765 * 對照品 鑒別(IR) 100366-200301 50mg
21766 * 對照品 含量測定(HPLC) 100367-200501 100mg
21767 *2 對照品 HPLC法含量測定用 100369-200301 50mg
21768 * 對照品 HPLC含量測定 100370-200301 50mg
21769 * 對照品 含量測定 100371-200301 50mg
21770 * 對照品 含量測定 100373-200301 50mg
21771 苯磺酸* 對照品 含量測定 100374-200301 100mg
21772 * 對照品 HPLC法含量測定 100375-200401 100mg
21773 * 對照品 UV法含量測定 100379-200501 100mg
21774 * 對照品 含量測定 100380-200301 50mg
21775 * 對照品 含量測定 100381-200301 50mg
21776 * 對照品 UV法含量測定 100384-200401 05ml
21777 豆腐果苷 對照品 HPLC含量測定 100385-200401 100mg
21778 哌拉西坦 對照品 含量測定(HPLC) 100386-200301 50mg
21779 夫拉扎勃(原:呋咱甲氫龍) 對照品 UV法含量測定 100387-200401 50mg
21780 * 對照品 HPLC法含量測定 100388-200401 100mg
21781 * 對照品 含量測定 100389-200301 50mg
21782 *1 對照品 含量測定(HPLC) 100390-200301 50mg
21783 *T 對照品 含量測定(HPLC) 100393-200501 100mg
21784 * 對照品 含量測定 100394-200401 100mg
21785 枸櫞酸 對照品 HPLC法含量測定用 100396-200301 200mg
21786 * 對照品 含量測定(HPLC) 100401-200501 100mg
21787 * 對照品 含量測定 100407-200301 50mg
下面我們分析Elisa試驗操作中可能影響結(jié)果的原因,并給出相應(yīng)的解決辦法:
1 選擇試劑:選擇質(zhì)量優(yōu)良的檢測試劑,嚴(yán)格按照試劑說明書進(jìn)行操作,操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
2 加樣:可能原因:
1)血清或血漿標(biāo)本分離不好即進(jìn)行加樣;
2)手工操作中,加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時間過長(特別是室內(nèi)溫度較高時); 3)加完標(biāo)本再加酶試劑時酶濺出孔外。
解決辦法:
1) 標(biāo)本為血清:將血液先自然存放1-2小時后,再用3000rmp離心15分鐘;標(biāo)本為血漿:必須使用含抗凝劑的血液標(biāo)本收集管,采血后必須立即顛倒*混合5-10次,放置一段時間后,3000rpm離心15分鐘;若在幾天內(nèi)檢測,可放在2-8℃冰箱中,若要貯存,則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。
2) 加樣后及時放入孵箱。
3) 加酶試劑后用吸水紙在酶標(biāo)板表面輕拭吸干。
4) 如果采用AT或其他全自動加樣,選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。
5) 標(biāo)本較多時,請分批操作。
3 孵育:可能原因:
1) 孵育時未貼封片或加蓋,使標(biāo)本或稀釋液蒸發(fā),吸附于孔壁,難于清洗*;
2) 孵育時間人為延長,導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周圍,難以清洗*。解決辦法:
1) 貼封片或加蓋;
2) 按說明步驟嚴(yán)格控制操作時間。
4 洗板:可能原因:
1) 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。
2) 采用半自動洗板機(jī)洗板時,洗液量不足,導(dǎo)致洗板不*;洗板針堵塞,抽吸不*;洗板不暢,導(dǎo)致洗板效果差。
3) 反應(yīng)板過多造成洗板等待時間長。 解決辦法:
1) 保證洗液注滿各孔,洗板針暢通,洗完板后在吸水紙(選擇干凈、無或少塵的吸水材料)上輕輕拍干;
2) 合理安排,或多用幾臺洗板機(jī)。
5顯色:可能原因:
1) 顯色劑配制后放置時間過長或使用過期顯色劑;
2) 加顯色劑時濺出孔外造成液體回流。解決辦法:
1) 顯色劑盡量在臨用前配制,堅持不用過期顯色劑,肉眼可見淺藍(lán)色的TMB顯色劑不用; 2) 加樣時保持顯色劑不外流;
3) A、B液應(yīng)避免接觸金屬器械。
6 終止:可能原因如加終止液時產(chǎn)生較多氣泡,導(dǎo)致假陽性增加。所以在加終止液時應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡。
7 讀板:如讀板時板底不清潔等。應(yīng)保證酶標(biāo)板清潔。
所以在整個操作過程中保證酶標(biāo)板不接觸次氯酸; 盡可能實現(xiàn)ELISA檢測標(biāo)準(zhǔn)自動化,有效提高檢測質(zhì)量。
在實際操作中,除了選擇優(yōu)良試劑外,必須嚴(yán)格按照操作步驟進(jìn)行操作,同時作好室內(nèi)質(zhì)控、室間質(zhì)評,以嚴(yán)謹(jǐn)?shù)墓ぷ髯黠L(fēng)檢測每一份標(biāo)本,才能保證檢測質(zhì)量?,F(xiàn)在國內(nèi)已有相當(dāng)數(shù)量的單位擁有全自動酶標(biāo)儀,這對于實現(xiàn)ELISA標(biāo)準(zhǔn)化檢測、提高檢測質(zhì)量起到了重要作用。
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