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上海紀(jì)寧酶聯(lián)科技有限公司
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更新時(shí)間:2016-12-27 21:50:43瀏覽次數(shù):330次
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人組織多肽抗原(TPA)ELISA試劑盒,ELISA試驗(yàn)以靈敏度較高、特異性較好的特點(diǎn)在酶聯(lián)免疫實(shí)驗(yàn)得到了廣泛的應(yīng)用,但操作中的各個(gè)環(huán)節(jié)對(duì)試驗(yàn)的檢測(cè)效果影響較大,如不注意,有可能導(dǎo)致顯色不全、花板等結(jié)果。
人組織多肽抗原(TPA)ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)ELISA結(jié)果判定常用的幾種方法:
1)目測(cè)定性法:加入底物經(jīng)酶解和終止反應(yīng)后,肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競(jìng)爭(zhēng)法則淺于)陰性對(duì)照;與陰性對(duì)照的顏色接近者,判定為陰性。
2)以樣品孔的OD值大于陰性對(duì)照OD值+2~3SD,作為陽性結(jié)果的閾值。
3)以P/N值(陽性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽性;P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑;P/N小于1.5為陰性。
4)定量測(cè)定結(jié)果根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中待測(cè)物的含量。
我們將在人組織多肽抗原(TPA)ELISA試劑盒操作中各個(gè)環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問題的原因及解決辦法總結(jié)于下,以期給客戶帶來一些啟發(fā),提高試驗(yàn)質(zhì)量。
21626 * 對(duì)照品 含量測(cè)定 0188-9701 50mg
21627 * 對(duì)照品 含量測(cè)定 0189-9501 50mg
21628 * 對(duì)照品 UV法溶出度檢查 100190-200402 100mg
21629 * 對(duì)照品 含量測(cè)定 100191-200305 50mg
21630 * 對(duì)照品 含量測(cè)定 0192-9501 50mg
21631 * 對(duì)照品 檢查 100193-199601 50mg
21632 * 對(duì)照品 含量測(cè)定 100194-200502 100mg
21633 * 對(duì)照品 含量測(cè)定 100195-199701 50mg
21634 鄰位甲酚 對(duì)照品 GC法含量測(cè)定用 100196-200302 1000mg
21635 * 對(duì)照品 檢查 0197-9601 50mg
21636 * 對(duì)照品 UV法含量測(cè)定 100198-200403 50mg
21637 * 對(duì)照品 含量測(cè)定 100199-199401 50mg
21638 青* 對(duì)照品 檢查 100200-200202 50mg
21639 氫溴酸右* 對(duì)照品 含量測(cè)定 100201-200502 100mg
21640 * 對(duì)照品 含量測(cè)定 100203-200503 100mg
21641 * 對(duì)照品 含量測(cè)定 0204-9701 50mg
21642 雙氰胺 對(duì)照品 TLC法檢查用 100206-200302 50mg
21643 * 對(duì)照品 含量測(cè)定 100208-200102 50mg
21644 * 對(duì)照品 含量測(cè)定 100209-199401 50mg
21645 * 對(duì)照品 UV法溶出度檢查 100210-200401 50mg
21646 辛可尼丁 對(duì)照品 檢查(TLC) 0211-9601 50mg
21647 溴甲貝那替嗪 對(duì)照品 檢查 100212-199701 50mg
21648 鹽酸安他唑啉 對(duì)照品 含量測(cè)定 0216-9701 50mg
21649 鹽酸*胺 對(duì)照品 含量測(cè)定用 100217-200303 100mg
21650 * 對(duì)照品 含量測(cè)定 100218-199601 50mg
21651 * 對(duì)照品 含量測(cè)定 100219-199902 50mg
21652 * 對(duì)照品 供檢查用 100221-200301 50mg
21653 鹽酸* 對(duì)照品 鑒別 100222-199401 50mg
21654 * 對(duì)照品 含量測(cè)定 100223-200102 50mg
21655 異* 對(duì)照品 含量測(cè)定 100224-0202 50mg
21656 * 對(duì)照品 含量測(cè)定 100225-200502 100mg
21657 半乳糖 對(duì)照品 HPLC法含量測(cè)定 100226-200404 50mg
21658 醋酸* 對(duì)照品 含量測(cè)定 100228-199802 50mg
21659 * 對(duì)照品 UV法含量測(cè)定 100229-200402 100mg
21660 果糖 對(duì)照品 HPLC含量測(cè)定 100231-200303 50mg
21661 * 對(duì)照品 檢查 100232-200201 50mg
21662 環(huán)己胺 對(duì)照品 比色法檢查;環(huán)拉酸鈉中VIS法檢查用 100233-200301 100mg
21663 * 對(duì)照品 HPLC含量測(cè)定 100234-200502 100mg
21664 己內(nèi)酰胺 對(duì)照品 檢查 100235-199701 50mg
21665 磷酸苯丙哌啉 對(duì)照品 含量測(cè)定 100237-199701 50mg
21666 * 對(duì)照品 含量測(cè)定 100238-199701 50mg
21667 * 對(duì)照品 含量測(cè)定 100241-200503 100mg
21668 * 對(duì)照品 HPLC法含量測(cè)定 100242-200402 50mg
21669 * 對(duì)照品 HPLC法含量測(cè)定 100243-200401 50mg
21670 * 對(duì)照品 檢查 100244-200502 100mg
21671 *鈉 對(duì)照品 檢查 100247-199601 50mg
21672 *12 對(duì)照品 含量測(cè)定 100248-200201 50mg
21673 * 對(duì)照品 鑒別 0249-9501 50mg
21674 * 對(duì)照品 GC法含量測(cè)定人組織多肽抗原(TPA)ELISA試劑盒 100251-200302 100mg
21675 亞*鈣 對(duì)照品 HPLC法含量測(cè)定 100252-200402 50mg
21676 * 對(duì)照品 含量測(cè)定 100253-200201 50mg
21677 * 對(duì)照品 含量測(cè)定 100257-200002 50mg
21678 * 對(duì)照品 HPLC、UV法含量測(cè)定 100258-200403 100mg
下面我們分析Elisa試驗(yàn)操作中可能影響結(jié)果的原因,并給出相應(yīng)的解決辦法:
1 選擇試劑:選擇質(zhì)量?jī)?yōu)良的檢測(cè)試劑,嚴(yán)格按照試劑說明書進(jìn)行操作,操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
2 加樣:可能原因:
1)血清或血漿標(biāo)本分離不好即進(jìn)行加樣;
2)手工操作中,加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時(shí)間過長(zhǎng)(特別是室內(nèi)溫度較高時(shí)); 3)加完標(biāo)本再加酶試劑時(shí)酶濺出孔外。
解決辦法:
1) 標(biāo)本為血清:將血液先自然存放1-2小時(shí)后,再用3000rmp離心15分鐘;標(biāo)本為血漿:必須使用含抗凝劑的血液標(biāo)本收集管,采血后必須立即顛倒*混合5-10次,放置一段時(shí)間后,3000rpm離心15分鐘;若在幾天內(nèi)檢測(cè),可放在2-8℃冰箱中,若要貯存,則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。
2) 加樣后及時(shí)放入孵箱。
3) 加酶試劑后用吸水紙?jiān)诿笜?biāo)板表面輕拭吸干。
4) 如果采用AT或其他全自動(dòng)加樣,選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。
5) 標(biāo)本較多時(shí),請(qǐng)分批操作。
3 孵育:可能原因:
1) 孵育時(shí)未貼封片或加蓋,使標(biāo)本或稀釋液蒸發(fā),吸附于孔壁,難于清洗*;
2) 孵育時(shí)間人為延長(zhǎng),導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周圍,難以清洗*。解決辦法:
1) 貼封片或加蓋;
2) 按說明步驟嚴(yán)格控制操作時(shí)間。
4 洗板:可能原因:
1) 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。
2) 采用半自動(dòng)洗板機(jī)洗板時(shí),洗液量不足,導(dǎo)致洗板不*;洗板針堵塞,抽吸不*;洗板不暢,導(dǎo)致洗板效果差。
3) 反應(yīng)板過多造成洗板等待時(shí)間長(zhǎng)。 解決辦法:
1) 保證洗液注滿各孔,洗板針暢通,洗完板后在吸水紙(選擇干凈、無或少塵的吸水材料)上輕輕拍干;
2) 合理安排,或多用幾臺(tái)洗板機(jī)。
5人組織多肽抗原(TPA)ELISA試劑盒顯色:可能原因:
1) 顯色劑配制后放置時(shí)間過長(zhǎng)或使用過期顯色劑;
2) 加顯色劑時(shí)濺出孔外造成液體回流。解決辦法:
1) 顯色劑盡量在臨用前配制,堅(jiān)持不用過期顯色劑,肉眼可見淺藍(lán)色的TMB顯色劑不用; 2) 加樣時(shí)保持顯色劑不外流;
3) A、B液應(yīng)避免接觸金屬器械。
6 終止:可能原因如加終止液時(shí)產(chǎn)生較多氣泡,導(dǎo)致假陽性增加。所以在加終止液時(shí)應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡。
7 讀板:如讀板時(shí)板底不清潔等。應(yīng)保證酶標(biāo)板清潔。
所以在整個(gè)操作過程中保證酶標(biāo)板不接觸次氯酸; 盡可能實(shí)現(xiàn)ELISA檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)自動(dòng)化,有效提高檢測(cè)質(zhì)量。
在實(shí)際操作中,除了選擇優(yōu)良試劑外,必須嚴(yán)格按照操作步驟進(jìn)行操作,同時(shí)作好室內(nèi)質(zhì)控、室間質(zhì)評(píng),以嚴(yán)謹(jǐn)?shù)墓ぷ髯黠L(fēng)檢測(cè)每一份標(biāo)本,才能保證檢測(cè)質(zhì)量。現(xiàn)在國(guó)內(nèi)已有相當(dāng)數(shù)量的單位擁有全自動(dòng)酶標(biāo)儀,這對(duì)于實(shí)現(xiàn)ELISA標(biāo)準(zhǔn)化檢測(cè)、提高檢測(cè)質(zhì)量起到了重要作用。
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