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上海紀(jì)寧酶聯(lián)科技有限公司
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更新時間:2017-01-25 22:34:55瀏覽次數(shù):156次
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人P53(P53)ELISA試劑盒,ELISA試驗以靈敏度較高、特異性較好的特點在酶聯(lián)免疫實驗得到了廣泛的應(yīng)用,但操作中的各個環(huán)節(jié)對試驗的檢測效果影響較大,如不注意,有可能導(dǎo)致顯色不全、花板等結(jié)果。
人P53(P53)ELISA試劑盒實驗ELISA結(jié)果判定常用的幾種方法:
1)目測定性法:加入底物經(jīng)酶解和終止反應(yīng)后,肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競爭法則淺于)陰性對照;與陰性對照的顏色接近者,判定為陰性。
2)以樣品孔的OD值大于陰性對照OD值+2~3SD,作為陽性結(jié)果的閾值。
3)以P/N值(陽性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽性;P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑;P/N小于1.5為陰性。
4)定量測定結(jié)果根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中待測物的含量。
我們將在人P53(P53)ELISA試劑盒操作中各個環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問題的原因及解決辦法總結(jié)于下,以期給客戶帶來一些啟發(fā),提高試驗質(zhì)量。
21359 白花前胡丙素 (+)-pareruptorin A HPLC≥98% 20mg/支
21360 貝母辛 Peimisine HPLC≥98% 20mg/支
21361 * Diosimin HPLC≥98% 20mg/支
21362 香蒲新苷 Typhaneoside HPLC≥98% 20mg/支
21363 哈巴俄苷 Harpagoside HPLC≥98% 20mg/支
21364 哈巴苷 harpgide HPLC≥98% 20mg/支
21365 安格洛甙C Angoroside C HPLC≥98% 20mg/支
21366 10-脫乙酰巴卡亭 10-Deacetyl baccatin HPLC≥98% 20mg/支
21367 知母皂苷BII Timosaponin b- II HPLC≥98% 20mg/支
21368 知母皂苷A3 Timosaponin a-Ⅲ HPLC≥98% 20mg/支
21369 麥冬皂苷A Ophiopogonin A HPLC≥98% 20mg/支
21370 麥冬皂苷B Ophiopogonin B HPLC≥98% 20mg/支
21371 麥冬皂苷C Ophiopogonin C HPLC≥98% 20mg/支
21372 麥冬皂苷D' Ophiopogonin D HPLC≥98% 20mg/支
21373 麥冬皂苷D' Ophiopogonin D' HPLC≥98% 10mg/支
21374 甲基麥冬二氫高異黃酮A Methylophiopogonanone A HPLC≥98% 20mg/支
21375 麥冬二氫高異黃酮A Ophiogonanone A HPLC≥98% 20mg/支
21376 山茱萸新苷 cor-nuside HPLC≥98% 20mg/支
21377 山茱萸苷 cornin HPLC≥98% 20mg/支
21378 莫諾苷 morroniside HPLC≥98% 20mg/支
21379 (R型)人參皂苷Rg2 Ginsenoside Rg2 HPLC≥98% 20mg/支
21380 商陸皂苷甲 esculentosideA HPLC≥98% 20mg/支
21381 商陸皂苷乙 esculentosideB HPLC≥98% 20mg/支
21382 商陸皂苷丙 esculentosideC HPLC≥98% 20mg/支
21383 商陸皂苷丁 esculentosideD HPLC≥98% 20mg/支
21384 商陸皂苷戊 esculentosideE HPLC≥98% 20mg/支
21385 牡荊素異鼠李糖苷 Rhamnosylvitexin HPLC≥98% 20mg/支
21386 牡荊素鼠李糖苷 vitexin-2″-o-rhamnoside HPLC≥98% 20mg/支
21387 牡荊素 Vitexin HPLC≥98% 20mg/支
21388 (R型)* Ginsenoside Rg3 HPLC≥98% 20mg/支
21389 (R型)原人參三醇 Protopanaxtriol HPLC≥98% 20mg/支
21390 *甲 Curcurbitacin IIa HPLC≥98% 20mg/支
21391 *乙 Curcurbitacin Iib HPLC≥98% 20mg/支
21392 蔓荊子黃素 vitexicarpin HPLC≥98% 20mg/支
21393 龍血素B LOUREIRIN B HPLC≥98% 20mg/支
21394 劍葉龍血素C Cochinchinenin C HPLC≥98% 20mg/支
21395 辛夷脂素 demethoxyaschantin HPLC≥98% 20mg/支
21396 *醚內(nèi)脂 Linderane HPLC≥98% 20mg/支
21397 漆黃素(非瑟酮/紫鉚素) Fisetin HPLC≥98% 20mg/支
21398 苦玄參苷ⅠA Piefeltarraenin ⅠA HPLC≥98% 20mg/支
21399 苦玄參苷ⅠB Piefeltarraenin ⅠB HPLC≥98% 20mg/支
21400 蘆薈苷 barbaloin HPLC≥98% 20mg/支
21401 白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ Atractylenolide I HPLC≥98% 20mg/支
21402 白術(shù)內(nèi)酯Ⅱ Atractylenolide II HPLC≥98% 20mg/支
21403 白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ Atractylenolide Ⅲ HPLC≥98% 20mg/支
21404 蟾毒靈 Bufalin HPLC≥98% 20mg/支
21405 膽酸(錯誤) Cholic Acid HPLC≥98% 20mg/支
21406 *人P53(P53)ELISA試劑盒 Bilirubin HPLC≥98% 20mg/支
21407 大葉茜草素 Rubimaillin HPLC≥98% 20mg/支
21408 *皂苷A Clinodiside A HPLC≥98% 20mg/支
21409 羥基*A hydroxysafflor yellow A HPLC≥98% 20mg/支
下面我們分析Elisa試驗操作中可能影響結(jié)果的原因,并給出相應(yīng)的解決辦法:
1 選擇試劑:選擇質(zhì)量優(yōu)良的檢測試劑,嚴(yán)格按照試劑說明書進行操作,操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
2 加樣:可能原因:
1)血清或血漿標(biāo)本分離不好即進行加樣;
2)手工操作中,加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時間過長(特別是室內(nèi)溫度較高時); 3)加完標(biāo)本再加酶試劑時酶濺出孔外。
解決辦法:
1) 標(biāo)本為血清:將血液先自然存放1-2小時后,再用3000rmp離心15分鐘;標(biāo)本為血漿:必須使用含抗凝劑的血液標(biāo)本收集管,采血后必須立即顛倒*混合5-10次,放置一段時間后,3000rpm離心15分鐘;若在幾天內(nèi)檢測,可放在2-8℃冰箱中,若要貯存,則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。
2) 加樣后及時放入孵箱。
3) 加酶試劑后用吸水紙在酶標(biāo)板表面輕拭吸干。
4) 如果采用AT或其他全自動加樣,選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。
5) 標(biāo)本較多時,請分批操作。
3 孵育:可能原因:
1) 孵育時未貼封片或加蓋,使標(biāo)本或稀釋液蒸發(fā),吸附于孔壁,難于清洗*;
2) 孵育時間人為延長,導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周圍,難以清洗*。解決辦法:
1) 貼封片或加蓋;
2) 按說明步驟嚴(yán)格控制操作時間。
4 洗板:可能原因:
1) 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。
2) 采用半自動洗板機洗板時,洗液量不足,導(dǎo)致洗板不*;洗板針堵塞,抽吸不*;洗板不暢,導(dǎo)致洗板效果差。
3) 反應(yīng)板過多造成洗板等待時間長。 解決辦法:
1) 保證洗液注滿各孔,洗板針暢通,洗完板后在吸水紙(選擇干凈、無或少塵的吸水材料)上輕輕拍干;
2) 合理安排,或多用幾臺洗板機。
5人P53(P53)ELISA試劑盒顯色:可能原因:
1) 顯色劑配制后放置時間過長或使用過期顯色劑;
2) 加顯色劑時濺出孔外造成液體回流。解決辦法:
1) 顯色劑盡量在臨用前配制,堅持不用過期顯色劑,肉眼可見淺藍色的TMB顯色劑不用; 2) 加樣時保持顯色劑不外流;
3) A、B液應(yīng)避免接觸金屬器械。
6 終止:可能原因如加終止液時產(chǎn)生較多氣泡,導(dǎo)致假陽性增加。所以在加終止液時應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡。
7 讀板:如讀板時板底不清潔等。應(yīng)保證酶標(biāo)板清潔。
所以在整個操作過程中保證酶標(biāo)板不接觸次氯酸; 盡可能實現(xiàn)ELISA檢測標(biāo)準(zhǔn)自動化,有效提高檢測質(zhì)量。
在實際操作中,除了選擇優(yōu)良試劑外,必須嚴(yán)格按照操作步驟進行操作,同時作好室內(nèi)質(zhì)控、室間質(zhì)評,以嚴(yán)謹(jǐn)?shù)墓ぷ髯黠L(fēng)檢測每一份標(biāo)本,才能保證檢測質(zhì)量。現(xiàn)在國內(nèi)已有相當(dāng)數(shù)量的單位擁有全自動酶標(biāo)儀,這對于實現(xiàn)ELISA標(biāo)準(zhǔn)化檢測、提高檢測質(zhì)量起到了重要作用。
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