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上海紀(jì)寧酶聯(lián)科技有限公司
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雙花扁豆凝集素(DBA)ELISA試劑盒,ELISA試驗(yàn)以靈敏度較高、特異性較好的特點(diǎn)在酶聯(lián)免疫實(shí)驗(yàn)得到了廣泛的應(yīng)用,但操作中的各個(gè)環(huán)節(jié)對(duì)試驗(yàn)的檢測(cè)效果影響較大,如不注意,有可能導(dǎo)致顯色不全、花板等結(jié)果。
雙花扁豆凝集素(DBA)ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)ELISA結(jié)果判定常用的幾種方法:
1)目測(cè)定性法:加入底物經(jīng)酶解和終止反應(yīng)后,肉眼觀察陽(yáng)性孔顏色明顯深于(競(jìng)爭(zhēng)法則淺于)陰性對(duì)照;與陰性對(duì)照的顏色接近者,判定為陰性。
2)以樣品孔的OD值大于陰性對(duì)照OD值+2~3SD,作為陽(yáng)性結(jié)果的閾值。
3)以P/N值(陽(yáng)性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽(yáng)性;P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑;P/N小于1.5為陰性。
4)定量測(cè)定結(jié)果根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中待測(cè)物的含量。
我們將在雙花扁豆凝集素(DBA)ELISA試劑盒操作中各個(gè)環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問(wèn)題的原因及解決辦法總結(jié)于下,以期給客戶帶來(lái)一些啟發(fā),提高試驗(yàn)質(zhì)量。
15644 肌氨酸脫氫酶(SARDH)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Sarcosine Dehydrogenase (SARDH) 48T/96T Homo sapiens (Human)
15645 小腦肽4(CBLN4)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Cerebellin 4 (CBLN4) 48T/96T Homo sapiens (Human)
15646 精脒/精胺N1-乙?;D(zhuǎn)移酶1(SAT1)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Spermidine/Spermine N1-Acetyltransferase 1 (SAT1) 48T/96T Homo sapiens (Human)
15647 精脒/精胺N1-乙酰基轉(zhuǎn)移酶2(SAT2)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Spermidine/Spermine N1-Acetyltransferase 2 (SAT2) 48T/96T Homo sapiens (Human)
15648 多胺氧化酶(PAOX)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Polyamine Oxidase (PAOX) 48T/96T Homo sapiens (Human)
15649 甘胺酸-N-甲基轉(zhuǎn)移酶(GNMT)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Glycine-N-Methyltransferase (GNMT) 48T/96T Homo sapiens (Human)
15650 肌醇單磷酸酶2(IMPA2)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Inositol Monophosphatase 2 (IMPA2) 48T/96T Homo sapiens (Human)
15651 肌醇單磷酸酶1(IMPA1)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Inositol Monophosphatase 1 (IMPA1) 48T/96T Homo sapiens (Human)
15652 肌原調(diào)節(jié)蛋白1(MYOZ1)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Myozenin 1 (MYOZ1) 48T/96T Homo sapiens (Human)
15653 筑絲蛋白3(TEKT3)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Tektin 3 (TEKT3) 48T/96T Homo sapiens (Human)
15654 筑絲蛋白1(TEKT1)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Tektin 1 (TEKT1) 48T/96T Homo sapiens (Human)
15655 多核糖核苷酸核苷轉(zhuǎn)移酶1(PNPT1)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Polyribonucleotide Nucleotidyltransferase 1 (PNPT1) 48T/96T Homo sapiens (Human)
15656 帶粘蛋白(ZAN)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Zonadhesin (ZAN) 48T/96T Homo sapiens (Human)
15657 合子阻滯基因1(ZAR1)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Zygote Arrest 1 (ZAR1) 48T/96T Homo sapiens (Human)
15658 海藻糖酶(TREH)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Trehalase (TREH) 48T/96T Homo sapiens (Human)
15659 脫氧尿苷三磷酸酶(DUT)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Deoxyuridine Triphosphatase (DUT) 48T/96T Homo sapiens (Human)
15660 Neurensin 1蛋白(NRSN1)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Neurensin 1 (NRSN1) 48T/96T Homo sapiens (Human)
15661 Neurensin 2蛋白(NRSN2)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Neurensin 2 (NRSN2) 48T/96T Homo sapiens (Human)
15662 玻璃體蛋白(VIT)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Vitrin (VIT) 48T/96T Homo sapiens (Human)
15663 血管抑制蛋白2(VASH2)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Vasohibin 2 (VASH2) 48T/96T Homo sapiens (Human)
15664 血管抑制蛋白1(VASH1)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Vasohibin 1 (VASH1) 48T/96T Homo sapiens (Human)
15665 糖醛基-2-磺基轉(zhuǎn)移酶(UST)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Uronyl-2-Sulfotransferase (UST) 48T/96T Homo sapiens (Human)
15666 尿苷二磷酸糖基轉(zhuǎn)移酶8(UGT8)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for UDP Glycosyltransferase 8 (UGT8) 48T/96T Homo sapiens (Human)
15667 泛醌蛋白4(UBQLN4)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Ubiquilin 4 (UBQLN4) 48T/96T Homo sapiens (Human)
15668 泛醌蛋白3(UBQLN3)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Ubiquilin 3 (UBQLN3) 48T/96T Homo sapiens (Human)
15669 泛醌蛋白2(UBQLN2)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Ubiquilin 2 (UBQLN2) 48T/96T Homo sapiens (Human)
15670 泛醌蛋白1(UBQLN1)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Ubiquilin 1 (UBQLN1) 48T/96T Homo sapiens (Human)
15671 泛核蛋白1(UBN1)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Ubinuclein 1 (UBN1) 48T/96T Homo sapiens (Human)
15672 轉(zhuǎn)化因子2α(TRA2α)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Transformer 2 Alpha (TRA2a) 48T/96T Homo sapiens (Human)
15673 *磺基轉(zhuǎn)移酶2(TPST2)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Tyrosylprotein Sulfotransferase 2 (TPST2) 48T/96T Homo sapiens (Human)
15674 *磺基轉(zhuǎn)移酶1(TPST1)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Tyrosylprotein Sulfotransferase 1 (TPST1) 48T/96T Homo sapiens (Human)
15675 胸苷酸合成酶(TYMS)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Thymidylate Synthetase (TYMS) 48T/96T Homo sapiens (Human)
15676 干擾素α17(IFNα17)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Interferon Alpha 17 (IFNa17) 48T/96T Homo sapiens (Human)
15677 干擾素α16(IFNα16)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Interferon Alpha 16 (IFNa16) 48T/96T Homo sapiens (Human)
15678 干擾素α14(IFNα14)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Interferon Alpha 14 (IFNa14) 48T/96T Homo sapiens (Human)
15679 干擾素α13(IFNα13)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Interferon Alpha 13 (IFNa13) 48T/96T Homo sapiens (Human)
15680 干擾素α10(IFNα10)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Interferon Alpha 10 (IFNa10) 48T/96T Homo sapiens (Human)
15681 干擾素α8(IFNα8)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Interferon Alpha 8 (IFNa8) 48T/96T Homo sapiens (Human)
15682 干擾素α7(IFNα7)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Interferon Alpha 7 (IFNa7) 48T/96T Homo sapiens雙花扁豆凝集素(DBA)ELISA試劑盒 (Human)
15683 干擾素α6(IFNα6)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Interferon Alpha 6 (IFNa6) 48T/96T Homo sapiens (Human)
15684 干擾素α5(IFNα5)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Interferon Alpha 5 (IFNa5) 48T/96T Homo sapiens (Human)
下面我們分析Elisa試驗(yàn)操作中可能影響結(jié)果的原因,并給出相應(yīng)的解決辦法:
1 選擇試劑:選擇質(zhì)量?jī)?yōu)良的檢測(cè)試劑,嚴(yán)格按照試劑說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作,操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
2 加樣:可能原因:
1)血清或血漿標(biāo)本分離不好即進(jìn)行加樣;
2)手工操作中,加樣板過(guò)多造成加樣后放入孵箱前等待時(shí)間過(guò)長(zhǎng)(特別是室內(nèi)溫度較高時(shí)); 3)加完標(biāo)本再加酶試劑時(shí)酶濺出孔外。
解決辦法:
1) 標(biāo)本為血清:將血液先自然存放1-2小時(shí)后,再用3000rmp離心15分鐘;標(biāo)本為血漿:必須使用含抗凝劑的血液標(biāo)本收集管,采血后必須立即顛倒*混合5-10次,放置一段時(shí)間后,3000rpm離心15分鐘;若在幾天內(nèi)檢測(cè),可放在2-8℃冰箱中,若要貯存,則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。
2) 加樣后及時(shí)放入孵箱。
3) 加酶試劑后用吸水紙?jiān)诿笜?biāo)板表面輕拭吸干。
4) 如果采用AT或其他全自動(dòng)加樣,選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。
5) 標(biāo)本較多時(shí),請(qǐng)分批操作。
3 孵育:可能原因:
1) 孵育時(shí)未貼封片或加蓋,使標(biāo)本或稀釋液蒸發(fā),吸附于孔壁,難于清洗*;
2) 孵育時(shí)間人為延長(zhǎng),導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周圍,難以清洗*。解決辦法:
1) 貼封片或加蓋;
2) 按說(shuō)明步驟嚴(yán)格控制操作時(shí)間。
4 洗板:可能原因:
1) 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。
2) 采用半自動(dòng)洗板機(jī)洗板時(shí),洗液量不足,導(dǎo)致洗板不*;洗板針堵塞,抽吸不*;洗板不暢,導(dǎo)致洗板效果差。
3) 反應(yīng)板過(guò)多造成洗板等待時(shí)間長(zhǎng)。 解決辦法:
1) 保證洗液注滿各孔,洗板針暢通,洗完板后在吸水紙(選擇干凈、無(wú)或少塵的吸水材料)上輕輕拍干;
2) 合理安排,或多用幾臺(tái)洗板機(jī)。
5雙花扁豆凝集素(DBA)ELISA試劑盒顯色:可能原因:
1) 顯色劑配制后放置時(shí)間過(guò)長(zhǎng)或使用過(guò)期顯色劑;
2) 加顯色劑時(shí)濺出孔外造成液體回流。解決辦法:
1) 顯色劑盡量在臨用前配制,堅(jiān)持不用過(guò)期顯色劑,肉眼可見(jiàn)淺藍(lán)色的TMB顯色劑不用; 2) 加樣時(shí)保持顯色劑不外流;
3) A、B液應(yīng)避免接觸金屬器械。
6 終止:可能原因如加終止液時(shí)產(chǎn)生較多氣泡,導(dǎo)致假陽(yáng)性增加。所以在加終止液時(shí)應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡。
7 讀板:如讀板時(shí)板底不清潔等。應(yīng)保證酶標(biāo)板清潔。
所以在整個(gè)操作過(guò)程中保證酶標(biāo)板不接觸次氯酸; 盡可能實(shí)現(xiàn)ELISA檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)自動(dòng)化,有效提高檢測(cè)質(zhì)量。
在實(shí)際操作中,除了選擇優(yōu)良試劑外,必須嚴(yán)格按照操作步驟進(jìn)行操作,同時(shí)作好室內(nèi)質(zhì)控、室間質(zhì)評(píng),以嚴(yán)謹(jǐn)?shù)墓ぷ髯黠L(fēng)檢測(cè)每一份標(biāo)本,才能保證檢測(cè)質(zhì)量?,F(xiàn)在國(guó)內(nèi)已有相當(dāng)數(shù)量的單位擁有全自動(dòng)酶標(biāo)儀,這對(duì)于實(shí)現(xiàn)ELISA標(biāo)準(zhǔn)化檢測(cè)、提高檢測(cè)質(zhì)量起到了重要作用。
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