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上海紀(jì)寧酶聯(lián)科技有限公司
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植物吲哚乙酸(IAA) ELISA試劑盒,ELISA試驗(yàn)以靈敏度較高、特異性較好的特點(diǎn)在酶聯(lián)免疫實(shí)驗(yàn)得到了廣泛的應(yīng)用,但操作中的各個(gè)環(huán)節(jié)對(duì)試驗(yàn)的檢測(cè)效果影響較大,如不注意,有可能導(dǎo)致顯色不全、花板等結(jié)果。
植物吲哚乙酸(IAA) ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)ELISA結(jié)果判定常用的幾種方法:
1)目測(cè)定性法:加入底物經(jīng)酶解和終止反應(yīng)后,肉眼觀(guān)察陽(yáng)性孔顏色明顯深于(競(jìng)爭(zhēng)法則淺于)陰性對(duì)照;與陰性對(duì)照的顏色接近者,判定為陰性。
2)以樣品孔的OD值大于陰性對(duì)照OD值+2~3SD,作為陽(yáng)性結(jié)果的閾值。
3)以P/N值(陽(yáng)性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽(yáng)性;P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑;P/N小于1.5為陰性。
4)定量測(cè)定結(jié)果根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)計(jì)算樣品中待測(cè)物的含量。
我們將在植物吲哚乙酸(IAA) ELISA試劑盒操作中各個(gè)環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問(wèn)題的原因及解決辦法總結(jié)于下,以期給客戶(hù)帶來(lái)一些啟發(fā),提高試驗(yàn)質(zhì)量。
15229 白介素22受體(IL2R)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Interleukin 22 Receptor (IL22R) 48T/96T Homo sapiens (Human)
15230 膜聯(lián)蛋白A9(ANXA9)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Annexin A9 (ANXA9) 48T/96T Homo sapiens (Human)
15231 膜聯(lián)蛋白A10(ANXA10)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Annexin A10 (ANXA10) 48T/96T Homo sapiens (Human)
15232 膜聯(lián)蛋白A7(ANXA7)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Annexin A7 (ANXA7) 48T/96T Homo sapiens (Human)
15233 膜聯(lián)蛋白A13(ANXA13)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Annexin A13 (ANXA13) 48T/96T Homo sapiens (Human)
15234 膜聯(lián)蛋白A8(ANXA8)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Annexin A8 (ANXA8) 48T/96T Homo sapiens (Human)
15235 Pannexin 1蛋白(PANX1)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Pannexin 1 (PANX1) 48T/96T Homo sapiens (Human)
15236 Pannexin 2蛋白(PANX2)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Pannexin 2 (PANX2) 48T/96T Homo sapiens (Human)
15237 Pannexin 3蛋白(PANX3)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Pannexin 3 (PANX3) 48T/96T Homo sapiens (Human)
15238 白介素1ζ(IL1ζ)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Interleukin 1 Zeta (IL1z) 48T/96T Homo sapiens (Human)
15239 白介素1ε(IL1ε)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Interleukin 1 Epsilon (IL1e) 48T/96T Homo sapiens (Human)
15240 脫氧核糖核酸酶Ⅹ(DNASEⅩ)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Deoxyribonuclease X (DNASEX) 48T/96T Homo sapiens (Human)
15241 乙醇脫氫酶2(ADH2)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Alcohol Dehydrogenase 2 (ADH2) 48T/96T Homo sapiens (Human)
15242 乙醇脫氫酶3(ADH3)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Alcohol Dehydrogenase 3 (ADH3) 48T/96T Homo sapiens (Human)
15243 乙醇脫氫酶4(ADH4)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Alcohol Dehydrogenase 4 (ADH4) 48T/96T Homo sapiens (Human)
15244 乙醇脫氫酶5(ADH5)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Alcohol Dehydrogenase 5 (ADH5) 48T/96T Homo sapiens (Human)
15245 乙醇脫氫酶6(ADH6)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Alcohol Dehydrogenase 6 (ADH6) 48T/96T Homo sapiens (Human)
15246 乙醇脫氫酶7(ADH7)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Alcohol Dehydrogenase 7 (ADH7) 48T/96T Homo sapiens (Human)
15247 分揀連接蛋白2(SNX2)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Sorting Nexin 2 (SNX2) 48T/96T Homo sapiens (Human)
15248 分揀連接蛋白3(SNX3)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Sorting Nexin 3 (SNX3) 48T/96T Homo sapiens (Human)
15249 分揀連接蛋白4(SNX4)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Sorting Nexin 4 (SNX4) 48T/96T Homo sapiens (Human)
15250 分揀連接蛋白5(SNX5)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Sorting Nexin 5 (SNX5) 48T/96T Homo sapiens (Human)
15251 分揀連接蛋白6(SNX6)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Sorting Nexin 6 (SNX6) 48T/96T Homo sapiens (Human)
15252 分揀連接蛋白19(SNX19)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Sorting Nexin 19 (SNX19) 48T/96T Homo sapiens (Human)
15253 分揀連接蛋白9(SNX9)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Sorting Nexin 9 (SNX9) 48T/96T Homo sapiens (Human)
15254 分揀連接蛋白8(SNX8)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Sorting Nexin 8 (SNX8) 48T/96T Homo sapiens (Human)
15255 分揀連接蛋白15(SNX15)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Sorting Nexin 15 (SNX15) 48T/96T Homo sapiens (Human)
15256 分揀連接蛋白1(SNX1)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Sorting Nexin 1 (SNX1) 48T/96T Homo sapiens (Human)
15257 連環(huán)蛋白α2(CTNNα2)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Catenin Alpha 2 (CTNNa2) 48T/96T Homo sapiens (Human)
15258 連環(huán)蛋白α3(CTNNα3)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Catenin Alpha 3 (CTNNa3) 48T/96T Homo sapiens (Human)
15259 連環(huán)蛋白δ1(CTNNδ1)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Catenin Delta 1 (CTNNd1) 48T/96T Homo sapiens (Human)
15260 連環(huán)蛋白δ2(CTNNδ2)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Catenin Delta 2 (CTNNd2) 48T/96T Homo sapiens (Human)
15261 組蛋白脫乙?;?(HDAC3)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Histone Deacetylase 3 (HDAC3) 48T/96T Homo sapiens (Human)
15262 組蛋白脫乙酰基酶4(HDAC4)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Histone Deacetylase 4 (HDAC4) 48T/96T Homo sapiens (Human)
15263 組蛋白脫乙?;?(HDAC5)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Histone Deacetylase 5 (HDAC5) 48T/96T Homo sapiens (Human)
15264 組蛋白脫乙?;?(HDAC7)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Histone Deacetylase 7 (HDAC7) 48T/96T Homo sapiens (Human)
15265 組蛋白脫乙?;?(HDAC8)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Histone Deacetylase 8 (HDAC8) 48T/96T Homo sapiens (Human)
15266 組蛋白脫乙?;?(HDAC9)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Histone Deacetylase 9 (HDAC9) 48T/96T Homo sapiens (Human)
15267 組蛋白脫乙酰基酶10(HDAC10)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Histone Deacetylase 10 (HDAC10) 48T/96T Homo sapiens (Human)
15268 組蛋白脫乙酰基酶11(HDAC11)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Histone Deacetylase 11 (HDAC11) 48T/96T Homo sapiens (Human)
15269 沉默調(diào)節(jié)蛋白3(SIRT3)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Sirtuin 3 (SIRT3) 48T/96T Homo sapiens (Human)
15270 沉默調(diào)節(jié)蛋白5(SIRT5)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Sirtuin 5 (SIRT5) 48T/96T Homo sapiens (Human)
15271 沉默調(diào)節(jié)蛋白7(SIRT7)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Sirtuin 7 (SIRT7) 48T/96T Homo sapiens (Human)
下面我們分析Elisa試驗(yàn)操作中可能影響結(jié)果的原因,并給出相應(yīng)的解決辦法:
1 選擇試劑:選擇質(zhì)量?jī)?yōu)良的檢測(cè)試劑,嚴(yán)格按照試劑說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作,操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
2 加樣:可能原因:
1)血清或血漿標(biāo)本分離不好即進(jìn)行加樣;
2)手工操作中,加樣板過(guò)多造成加樣后放入孵箱前等待時(shí)間過(guò)長(zhǎng)(特別是室內(nèi)溫度較高時(shí)); 3)加完標(biāo)本再加酶試劑時(shí)酶濺出孔外。
解決辦法:
1) 標(biāo)本為血清:將血液先自然存放1-2小時(shí)后,再用3000rmp離心15分鐘;標(biāo)本為血漿:必須使用含抗凝劑的血液標(biāo)本收集管,采血后必須立即顛倒*混合5-10次,放置一段時(shí)間后,3000rpm離心15分鐘;若在幾天內(nèi)檢測(cè),可放在2-8℃冰箱中,若要貯存,則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。
2) 加樣后及時(shí)放入孵箱。
3) 加酶試劑后用吸水紙?jiān)诿笜?biāo)板表面輕拭吸干。
4) 如果采用AT或其他全自動(dòng)加樣,選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。
5) 標(biāo)本較多時(shí),請(qǐng)分批操作。
3 孵育:可能原因:
1) 孵育時(shí)未貼封片或加蓋,使標(biāo)本或稀釋液蒸發(fā),吸附于孔壁,難于清洗*;
2) 孵育時(shí)間人為延長(zhǎng),導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周?chē)?,難以清洗*。解決辦法:
1) 貼封片或加蓋;
2) 按說(shuō)明步驟嚴(yán)格控制操作時(shí)間。
4 洗板:可能原因:
1) 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。
2) 采用半自動(dòng)洗板機(jī)洗板時(shí),洗液量不足,導(dǎo)致洗板不*;洗板針堵塞,抽吸不*;洗板不暢,導(dǎo)致洗板效果差。
3) 反應(yīng)板過(guò)多造成洗板等待時(shí)間長(zhǎng)。 解決辦法:
1) 保證洗液注滿(mǎn)各孔,洗板針暢通,洗完板后在吸水紙(選擇干凈、無(wú)或少塵的吸水材料)上輕輕拍干;
2) 合理安排,或多用幾臺(tái)洗板機(jī)。
5顯色:可能原因:
1) 顯色劑配制后放置時(shí)間過(guò)長(zhǎng)或使用過(guò)期顯色劑;
2) 加顯色劑時(shí)濺出孔外造成液體回流。解決辦法:
1) 顯色劑盡量在臨用前配制,堅(jiān)持不用過(guò)期顯色劑,肉眼可見(jiàn)淺藍(lán)色的TMB顯色劑不用; 2) 加樣時(shí)保持顯色劑不外流;
3) A、B液應(yīng)避免接觸金屬器械。
6 終止:可能原因如加終止液時(shí)產(chǎn)生較多氣泡,導(dǎo)致假陽(yáng)性增加。所以在加終止液時(shí)應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡。
7 讀板:如讀板時(shí)板底不清潔等。應(yīng)保證酶標(biāo)板清潔。
所以在整個(gè)操作過(guò)程中保證酶標(biāo)板不接觸次氯酸; 盡可能實(shí)現(xiàn)ELISA檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)自動(dòng)化,有效提高檢測(cè)質(zhì)量。
在實(shí)際操作中,除了選擇優(yōu)良試劑外,必須嚴(yán)格按照操作步驟進(jìn)行操作,同時(shí)作好室內(nèi)質(zhì)控、室間質(zhì)評(píng),以嚴(yán)謹(jǐn)?shù)墓ぷ髯黠L(fēng)檢測(cè)每一份標(biāo)本,才能保證檢測(cè)質(zhì)量。現(xiàn)在國(guó)內(nèi)已有相當(dāng)數(shù)量的單位擁有全自動(dòng)酶標(biāo)儀,這對(duì)于實(shí)現(xiàn)ELISA標(biāo)準(zhǔn)化檢測(cè)、提高檢測(cè)質(zhì)量起到了重要作用。
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