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上海紀(jì)寧酶聯(lián)科技有限公司
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植物玉米索核苷(ZR )ELISA試劑盒,ELISA試驗(yàn)以靈敏度較高、特異性較好的特點(diǎn)在酶聯(lián)免疫實(shí)驗(yàn)得到了廣泛的應(yīng)用,但操作中的各個環(huán)節(jié)對試驗(yàn)的檢測效果影響較大,如不注意,有可能導(dǎo)致顯色不全、花板等結(jié)果。
植物玉米索核苷(ZR )ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)ELISA結(jié)果判定常用的幾種方法:
1)目測定性法:加入底物經(jīng)酶解和終止反應(yīng)后,肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競爭法則淺于)陰性對照;與陰性對照的顏色接近者,判定為陰性。
2)以樣品孔的OD值大于陰性對照OD值+2~3SD,作為陽性結(jié)果的閾值。
3)以P/N值(陽性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽性;P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑;P/N小于1.5為陰性。
4)定量測定結(jié)果根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中待測物的含量。
我們將在植物玉米索核苷(ZR )ELISA試劑盒操作中各個環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問題的原因及解決辦法總結(jié)于下,以期給客戶帶來一些啟發(fā),提高試驗(yàn)質(zhì)量。
15017 脫氧胸苷酸激酶(DTYMK)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Deoxythymidylate Kinase (DTYMK) 48T/96T Homo sapiens (Human)
15018 類*δ1(TPSδ1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Tryptase Delta 1 (TPSd1) 48T/96T Homo sapiens (Human)
15019 類*γ1(TPSγ1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Tryptase Gamma 1 (TPSg1) 48T/96T Homo sapiens (Human)
15020 甘丙肽受體4(GALR4)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Galanin Receptor 4 (GALR4) 48T/96T Homo sapiens (Human)
15021 甘丙肽受體3(GALR3)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Galanin Receptor 3 (GALR3) 48T/96T Homo sapiens (Human)
15022 甘丙肽受體2(GALR2)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Galanin Receptor 2 (GALR2) 48T/96T Homo sapiens (Human)
15023 金屬硫蛋白1X(MT1X)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Metallothionein 1X (MT1X) 48T/96T Homo sapiens (Human)
15024 金屬硫蛋白1H(MT1H)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Metallothionein 1H (MT1H) 48T/96T Homo sapiens (Human)
15025 金屬硫蛋白1F(MT1F)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Metallothionein 1F (MT1F) 48T/96T Homo sapiens (Human)
15026 金屬硫蛋白1G(MT1G)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Metallothionein 1G (MT1G) 48T/96T Homo sapiens (Human)
15027 金屬硫蛋白1B(MT1B)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Metallothionein 1B (MT1B) 48T/96T Homo sapiens (Human)
15028 拓?fù)洚悩?gòu)酶Ⅲ(TOP3)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Topoisomerase III (TOP3) 48T/96T Homo sapiens (Human)
15029 血小板反應(yīng)蛋白3(THBS3)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Thrombospondin 3 (THBS3) 48T/96T Homo sapiens (Human)
15030 滑行蛋白β(TXLNβ)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Taxilin Beta (TXLNb) 48T/96T Homo sapiens (Human)
15031 磷脂酶D2(PLD2)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Phospholipase D2 (PLD2) 48T/96T Homo sapiens (Human)
15032 磷脂爬行酶3(PLSCR3)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Phospholipid Scramblase 3 (PLSCR3) 48T/96T Homo sapiens (Human)
15033 磷脂爬行酶4(PLSCR4)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Phospholipid Scramblase 4 (PLSCR4) 48T/96T Homo sapiens (Human)
15034 溶血磷脂酶Ⅱ(LYPLA2)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Lysophospholipase II (LYPLA2) 48T/96T Homo sapiens (Human)
15035 發(fā)動蛋白3(DNM3)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Dynamin 3 (DNM3) 48T/96T Homo sapiens (Human)
15036 天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶2(AST2)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Aspartate Aminotransferase 2 (AST2) 48T/96T Homo sapiens (Human)
15037 谷丙轉(zhuǎn)氨酶2(ALT2)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Alanine Aminotransferase 2 (ALT2) 48T/96T Homo sapiens (Human)
15038 4-氨基丁酸轉(zhuǎn)氨酶(ABAT)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for 4-Aminobutyrate Aminotransferase (ABAT) 48T/96T Homo sapiens (Human)
15039 *轉(zhuǎn)氨酶(OAT)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Ornithine Aminotransferase (OAT) 48T/96T Homo sapiens (Human)
15040 磷酸*轉(zhuǎn)氨酶1(PSAT1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Phosphoserine Aminotransferase 1 (PSAT1) 48T/96T Homo sapiens (Human)
15041 *轉(zhuǎn)氨酶(TAT)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Tyrosine Aminotransferase (TAT) 48T/96T Homo sapiens (Human)
15042 松弛肽2(RLN2)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Relaxin 2 (RLN2) 48T/96T Homo sapiens (Human)
15043 松弛肽3(RLN3)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Relaxin 3 (RLN3) 48T/96T Homo sapiens (Human)
15044 二肽基肽酶3(DPP3)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Dipeptidyl Peptidase 3 (DPP3) 48T/96T Homo sapiens (Human)
15045 二肽基肽酶7(DPP7)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Dipeptidyl Peptidase 7 (DPP7) 48T/96T Homo sapiens (Human)
15046 二肽基肽酶8(DPP8)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Dipeptidyl Peptidase 8 (DPP8) 48T/96T Homo sapiens (Human)
15047 胞漿-5',3'-核苷酸酶(NT5C)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for 5',3'-Nucleotidase, Cytosolic (NT5C) 48T/96T Homo sapiens (Human)
15048 線粒體-5'-核苷酸酶(NT5M)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for 5'-Nucleotidase, Mitochondrial (NT5M) 48T/96T Homo sapiens (Human)
15049 3',5'-二磷酸核苷酸酶1(BPNT1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for 3',5'-Bisphosphate Nucleotidase 1 (BPNT1) 48T/96T Homo sapiens (Human)
15050 睪丸受體2(TR2)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Testicular Receptor 2 (TR2) 48T/96T Homo sapiens (Human)
15051 睪丸受體4(TR4)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Testicular Receptor 4 (TR4) 48T/96T Homo sapiens (Human)
15052 延伸蛋白A2(ELOA2)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Elongin A2 (ELOA2) 48T/96T Homo sapiens (Human)
15053 延伸蛋白B(ELOB)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Elongin B (ELOB) 48T/96T Homo sapiens (Human)
15054 延伸蛋白C(ELOC)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Elongin C (ELOC) 48T/96T Homo sapiens (Human)
15055 二甲基*二甲胺水解酶2(DDAH2)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Dimethylarginine Dimethylaminohydrolase 2 (DDAH2) 48T/96T Homo sapiens (Human)
下面我們分析Elisa試驗(yàn)操作中可能影響結(jié)果的原因,并給出相應(yīng)的解決辦法:
1 選擇試劑:選擇質(zhì)量優(yōu)良的檢測試劑,嚴(yán)格按照試劑說明書進(jìn)行操作,操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
2 加樣:可能原因:
1)血清或血漿標(biāo)本分離不好即進(jìn)行加樣;
2)手工操作中,加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時(shí)間過長(特別是室內(nèi)溫度較高時(shí)); 3)加完標(biāo)本再加酶試劑時(shí)酶濺出孔外。
解決辦法:
1) 標(biāo)本為血清:將血液先自然存放1-2小時(shí)后,再用3000rmp離心15分鐘;標(biāo)本為血漿:必須使用含抗凝劑的血液標(biāo)本收集管,采血后必須立即顛倒*混合5-10次,放置一段時(shí)間后,3000rpm離心15分鐘;若在幾天內(nèi)檢測,可放在2-8℃冰箱中,若要貯存,則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。
2) 加樣后及時(shí)放入孵箱。
3) 加酶試劑后用吸水紙?jiān)诿笜?biāo)板表面輕拭吸干。
4) 如果采用AT或其他全自動加樣,選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。
5) 標(biāo)本較多時(shí),請分批操作。
3 孵育:可能原因:
1) 孵育時(shí)未貼封片或加蓋,使標(biāo)本或稀釋液蒸發(fā),吸附于孔壁,難于清洗*;
2) 孵育時(shí)間人為延長,導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周圍,難以清洗*。解決辦法:
1) 貼封片或加蓋;
2) 按說明步驟嚴(yán)格控制操作時(shí)間。
4 洗板:可能原因:
1) 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。
2) 采用半自動洗板機(jī)洗板時(shí),洗液量不足,導(dǎo)致洗板不*;洗板針堵塞,抽吸不*;洗板不暢,導(dǎo)致洗板效果差。
3) 反應(yīng)板過多造成洗板等待時(shí)間長。 解決辦法:
1) 保證洗液注滿各孔,洗板針暢通,洗完板后在吸水紙(選擇干凈、無或少塵的吸水材料)上輕輕拍干;
2) 合理安排,或多用幾臺洗板機(jī)。
5顯色:可能原因:
1) 顯色劑配制后放置時(shí)間過長或使用過期顯色劑;
2) 加顯色劑時(shí)濺出孔外造成液體回流。解決辦法:
1) 顯色劑盡量在臨用前配制,堅(jiān)持不用過期顯色劑,肉眼可見淺藍(lán)色的TMB顯色劑不用; 2) 加樣時(shí)保持顯色劑不外流;
3) A、B液應(yīng)避免接觸金屬器械。
6 終止:可能原因如加終止液時(shí)產(chǎn)生較多氣泡,導(dǎo)致假陽性增加。所以在加終止液時(shí)應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡。
7 讀板:如讀板時(shí)板底不清潔等。應(yīng)保證酶標(biāo)板清潔。
所以在整個操作過程中保證酶標(biāo)板不接觸次氯酸; 盡可能實(shí)現(xiàn)ELISA檢測標(biāo)準(zhǔn)自動化,有效提高檢測質(zhì)量。
在實(shí)際操作中,除了選擇優(yōu)良試劑外,必須嚴(yán)格按照操作步驟進(jìn)行操作,同時(shí)作好室內(nèi)質(zhì)控、室間質(zhì)評,以嚴(yán)謹(jǐn)?shù)墓ぷ髯黠L(fēng)檢測每一份標(biāo)本,才能保證檢測質(zhì)量?,F(xiàn)在國內(nèi)已有相當(dāng)數(shù)量的單位擁有全自動酶標(biāo)儀,這對于實(shí)現(xiàn)ELISA標(biāo)準(zhǔn)化檢測、提高檢測質(zhì)量起到了重要作用。
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