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上海紀(jì)寧酶聯(lián)科技有限公司
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山羊β內(nèi)啡肽(β-EP)ELISA試劑盒,ELISA試驗(yàn)以靈敏度較高、特異性較好的特點(diǎn)在酶聯(lián)免疫實(shí)驗(yàn)得到了廣泛的應(yīng)用,但操作中的各個(gè)環(huán)節(jié)對(duì)試驗(yàn)的檢測(cè)效果影響較大,如不注意,有可能導(dǎo)致顯色不全、花板等結(jié)果。
山羊β內(nèi)啡肽(β-EP)ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)ELISA結(jié)果判定常用的幾種方法:
1)目測(cè)定性法:加入底物經(jīng)酶解和終止反應(yīng)后,肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競(jìng)爭(zhēng)法則淺于)陰性對(duì)照;與陰性對(duì)照的顏色接近者,判定為陰性。
2)以樣品孔的OD值大于陰性對(duì)照OD值+2~3SD,作為陽性結(jié)果的閾值。
3)以P/N值(陽性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽性;P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑;P/N小于1.5為陰性。
4)定量測(cè)定結(jié)果根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中待測(cè)物的含量。
我們將在山羊β內(nèi)啡肽(β-EP)ELISA試劑盒操作中各個(gè)環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問題的原因及解決辦法總結(jié)于下,以期給客戶帶來一些啟發(fā),提高試驗(yàn)質(zhì)量。
12551 ATP結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白A1(ABCA1)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for ATP Binding Cassette Transporter A1 (ABCA1) 48T/96T Mus musculus (Mouse)
12552 碳酸酐酶Ⅸ(CA9)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Carbonic Anhydrase IX (CA9) 48T/96T Mus musculus (Mouse)
12553 味覺受體1型成員2(TAS1R2)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Taste Receptor Type 1 Member 2 (TAS1R2) 48T/96T Mus musculus (Mouse)
12554 輕肽神經(jīng)絲蛋白(NEFL)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Neurofilament, Light Polypeptide (NEFL) 48T/96T Homo sapiens (Human)
12555 *Ⅻ(F12)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Coagulation Factor XII (F12) 48T/96T Mus musculus (Mouse)
12556 *S轉(zhuǎn)移酶α3(GSTα3)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Glutathione S Transferase Alpha 3 (GSTa3) 48T/96T Rattus norvegicus (Rat)
12557 IgE-Fc片段受體Ⅱ(FcεRⅡ)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Receptor II For The Fc Region Of Immunoglobulin E (FceRII) 48T/96T Mus musculus (Mouse)
12558 色胺酸羥化酶1(TPH1)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Tryptophan Hydroxylase 1 (TPH1) 48T/96T Rattus norvegicus (Rat)
12559 *結(jié)合蛋白1(RBP1)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Retinol Binding Protein 1, Cellular (RBP1) 48T/96T Homo sapiens (Human)
12560 G蛋白β1(GNβ1)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for G Protein Beta 1 (GNb1) 48T/96T Mus musculus (Mouse)
12561 轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β受體Ⅱ(TGFβR2)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Transforming Growth Factor Beta Receptor II (TGFbR2) 48T/96T Homo sapiens (Human)
12562 死骨片1(SQSTM1)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Sequestosome 1 (SQSTM1) 48T/96T Homo sapiens (Human)
12563 胃內(nèi)因子(GIF)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Gastric Intrinsic Factor (GIF) 48T/96T Homo sapiens (Human)
12564 前蛋白轉(zhuǎn)化酶枯草溶菌素1(PCSK1)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Proprotein Convertase Subtilisin/Kexin Type 1 (PCSK1) 48T/96T Homo sapiens (Human)
12565 細(xì)胞維甲酸結(jié)合蛋白2(CRABP2)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Cellular Retinoic Acid Binding Protein 2 (CRABP2) 48T/96T Homo sapiens (Human)
12566 驅(qū)動(dòng)蛋白家族成員1A(KIF1A)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Kinesin Family, Member 1A (KIF1A) 48T/96T Homo sapiens (Human)
12567 頭蛋白(NOG)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Noggin (NOG) 48T/96T Rattus norvegicus (Rat)
12568 載脂蛋白B100(APOB100)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Apolipoprotein B100 (APOB100) 48T/96T Bos taurus; Bovine (Cattle)
12569 白介素25(IL25)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Interleukin 25 (IL25) 48T/96T Mus musculus (Mouse)
12570 胱天蛋白酶1(CASP1)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Caspase 1 (CASP1) 48T/96T Rattus norvegicus (Rat)
12571 成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子15(FGF15)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Fibroblast Growth Factor 15 (FGF15) 48T/96T Mus musculus (Mouse)
12572 線粒體解偶聯(lián)蛋白1(UCP1)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Uncoupling Protein 1, Mitochondrial (UCP1) 48T/96T Mus musculus (Mouse)
12573 分泌型免疫球蛋白A(sIgA)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Secretory Immunoglobulin A (sIgA) 48T/96T Bos taurus; Bovine (Cattle)
12574 趨化因子C-X-C-基元受體4(CXCR4)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Chemokine C-X-C-Motif Receptor 4 (CXCR4) 48T/96T Sus scrofa; Porcine (Pig)
12575 信號(hào)素3A(SEMA3A)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Semaphorin 3A (SEMA3A) 48T/96T Homo sapiens (Human)
12576 神經(jīng)束蛋白(NFASC)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Neurofascin (NFASC) 48T/96T Homo sapiens (Human)
12577 肉毒堿棕櫚?;D(zhuǎn)移酶2(CPT2)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Carnitine Palmitoyltransferase 2, Mitochondrial (CPT2) 48T/96T Homo sapiens (Human)
12578 膜聯(lián)蛋白A3(ANXA3)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Annexin A3 (ANXA3) 48T/96T Homo sapiens (Human)
12579 肉毒堿棕櫚?;D(zhuǎn)移酶1B(CPT1B)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Carnitine Palmitoyltransferase 1B, Muscle (CPT1B) 48T/96T Homo sapiens (Human)
12580 四旋蛋白1(TSPAN1)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Tetraspanin 1 (TSPAN1) 48T/96T Homo sapiens (Human)
12581 *豐富重復(fù)LGI家族成員3(LGI3)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Leucine Rich Repeat LGI Family, Member 3 (LGI3) 48T/96T Mus musculus (Mouse)
12582 白介素1受體輔助蛋白樣蛋白2(IL1RAPL2)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Interleukin 1 Receptor Accessory Protein Like Protein 2 (IL1RAPL2) 48T/96T Homo sapiens (Human)
12583 分泌性白細(xì)胞蛋白酶抑制因子(SLPI)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Secretory Leukocyte Peptidase Inhibitor (SLPI) 48T/96T Mus musculus (Mouse)
12584 天冬酰胺內(nèi)肽酶(LGMN)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Legumain (LGMN) 48T/96T Homo sapiens (Human)
12585 干擾素調(diào)節(jié)因子9(IRF9)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Interferon Regulatory Factor 9 (IRF9) 48T/96T Homo sapiens (Human)
12586 分泌型卷曲相關(guān)蛋白1(SFRP1)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Secreted Frizzled Related Protein 1 (SFRP1) 48T/96T Mus musculus (Mouse)
12587 整合素β1(ITGβ1)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Integrin Beta 1 (ITGb1) 48T/96T Homo sapiens (Human)
12588 脂肪酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白5(FATP5)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Fatty Acid Transport Protein 5 (FATP5) 48T/96T Homo sapiens (Human)
12589 血管生成素樣蛋白3(ANGPTL3)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Angiopoietin Like Protein 3 (ANGPTL3) 48T/96T Mus musculus (Mouse)
12590 *豐富重復(fù)LGI家族成員3(LGI3)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Leucine Rich Repeat LGI Family, Member 3 (LGI3) 48T/96T Homo sapiens (Human)
12591 多聚蛋白1(MMRN1)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Multimerin 1 (MMRN1) 48T/96T Homo sapiens山羊β內(nèi)啡肽(β-EP)ELISA試劑盒 (Human)
12592 低氧誘導(dǎo)因子2α(HIF2α)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Hypoxia Inducible Factor 2 Alpha (HIF2a) 48T/96T Homo sapiens (Human)
12593 低氧誘導(dǎo)因子2α(HIF2α)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Hypoxia Inducible Factor 2 Alpha (HIF2a) 48T/96T Mus musculus (Mouse)
下面我們分析Elisa試驗(yàn)操作中可能影響結(jié)果的原因,并給出相應(yīng)的解決辦法:
1 選擇試劑:選擇質(zhì)量?jī)?yōu)良的檢測(cè)試劑,嚴(yán)格按照試劑說明書進(jìn)行操作,操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
2 加樣:可能原因:
1)血清或血漿標(biāo)本分離不好即進(jìn)行加樣;
2)手工操作中,加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時(shí)間過長(zhǎng)(特別是室內(nèi)溫度較高時(shí)); 3)加完標(biāo)本再加酶試劑時(shí)酶濺出孔外。
解決辦法:
1) 標(biāo)本為血清:將血液先自然存放1-2小時(shí)后,再用3000rmp離心15分鐘;標(biāo)本為血漿:必須使用含抗凝劑的血液標(biāo)本收集管,采血后必須立即顛倒*混合5-10次,放置一段時(shí)間后,3000rpm離心15分鐘;若在幾天內(nèi)檢測(cè),可放在2-8℃冰箱中,若要貯存,則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。
2) 加樣后及時(shí)放入孵箱。
3) 加酶試劑后用吸水紙?jiān)诿笜?biāo)板表面輕拭吸干。
4) 如果采用AT或其他全自動(dòng)加樣,選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。
5) 標(biāo)本較多時(shí),請(qǐng)分批操作。
3 孵育:可能原因:
1) 孵育時(shí)未貼封片或加蓋,使標(biāo)本或稀釋液蒸發(fā),吸附于孔壁,難于清洗*;
2) 孵育時(shí)間人為延長(zhǎng),導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周圍,難以清洗*。解決辦法:
1) 貼封片或加蓋;
2) 按說明步驟嚴(yán)格控制操作時(shí)間。
4 洗板:可能原因:
1) 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。
2) 采用半自動(dòng)洗板機(jī)洗板時(shí),洗液量不足,導(dǎo)致洗板不*;洗板針堵塞,抽吸不*;洗板不暢,導(dǎo)致洗板效果差。
3) 反應(yīng)板過多造成洗板等待時(shí)間長(zhǎng)。 解決辦法:
1) 保證洗液注滿各孔,洗板針暢通,洗完板后在吸水紙(選擇干凈、無或少塵的吸水材料)上輕輕拍干;
2) 合理安排,或多用幾臺(tái)洗板機(jī)。
5山羊β內(nèi)啡肽(β-EP)ELISA試劑盒顯色:可能原因:
1) 顯色劑配制后放置時(shí)間過長(zhǎng)或使用過期顯色劑;
2) 加顯色劑時(shí)濺出孔外造成液體回流。解決辦法:
1) 顯色劑盡量在臨用前配制,堅(jiān)持不用過期顯色劑,肉眼可見淺藍(lán)色的TMB顯色劑不用; 2) 加樣時(shí)保持顯色劑不外流;
3) A、B液應(yīng)避免接觸金屬器械。
6 終止:可能原因如加終止液時(shí)產(chǎn)生較多氣泡,導(dǎo)致假陽性增加。所以在加終止液時(shí)應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡。
7 讀板:如讀板時(shí)板底不清潔等。應(yīng)保證酶標(biāo)板清潔。
所以在整個(gè)操作過程中保證酶標(biāo)板不接觸次氯酸; 盡可能實(shí)現(xiàn)ELISA檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)自動(dòng)化,有效提高檢測(cè)質(zhì)量。
在實(shí)際操作中,除了選擇優(yōu)良試劑外,必須嚴(yán)格按照操作步驟進(jìn)行操作,同時(shí)作好室內(nèi)質(zhì)控、室間質(zhì)評(píng),以嚴(yán)謹(jǐn)?shù)墓ぷ髯黠L(fēng)檢測(cè)每一份標(biāo)本,才能保證檢測(cè)質(zhì)量。現(xiàn)在國(guó)內(nèi)已有相當(dāng)數(shù)量的單位擁有全自動(dòng)酶標(biāo)儀,這對(duì)于實(shí)現(xiàn)ELISA標(biāo)準(zhǔn)化檢測(cè)、提高檢測(cè)質(zhì)量起到了重要作用。
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