魚雌激素（E）ELISA試劑盒實驗ELISA結(jié)果判定常用的幾種方法：
1)目測定性法：加入底物經(jīng)酶解和終止反應(yīng)后，肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競爭法則淺于)陰性對照；與陰性對照的顏色接近者，判定為陰性。
2)以樣品孔的OD值大于陰性對照OD值+2～3SD，作為陽性結(jié)果的閾值。
3)以P／N值(陽性孔OD值／陰性孔OD值)大于或等于2．1為陽性；P／N值小于2．1，但大于1．5為可疑；P／N小于1．5為陰性。
4)定量測定結(jié)果根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中待測物的含量。
我們將在魚雌激素（E）ELISA試劑盒操作中各個環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問題的原因及解決辦法總結(jié)于下，以期給客戶帶來一些啟發(fā)，提高試驗質(zhì)量。

11561 轉(zhuǎn)化生長因子β誘導(dǎo)蛋白(TGFβI)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Transforming Growth Factor Beta Induced Protein (TGFbI) 48T/96T Bos taurus; Bovine (Cattle)
11562 轉(zhuǎn)化生長因子β3(TGFβ3)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Transforming Growth Factor Beta 3 (TGFb3) 48T/96T Canis familiaris; Canine (Dog)
11563 轉(zhuǎn)化生長因子β3(TGFβ3)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Transforming Growth Factor Beta 3 (TGFb3) 48T/96T Capra hircus; Caprine (Goat)
11564 轉(zhuǎn)化生長因子β3(TGFβ3)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Transforming Growth Factor Beta 3 (TGFb3) 48T/96T Equus caballus; Equine (Horse)
11565 轉(zhuǎn)化生長因子β誘導(dǎo)蛋白(TGFβI)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Transforming Growth Factor Beta Induced Protein (TGFbI) 48T/96T Danio rerio (Zebrafish)
11566 轉(zhuǎn)化生長因子β3(TGFβ3)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Transforming Growth Factor Beta 3 (TGFb3) 48T/96T Chicken (Gallus)
11567 轉(zhuǎn)化生長因子β3(TGFβ3)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Transforming Growth Factor Beta 3 (TGFb3) 48T/96T Cavia (Guinea pig )
11568 轉(zhuǎn)化生長因子β誘導(dǎo)蛋白(TGFβI)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Transforming Growth Factor Beta Induced Protein (TGFbI) 48T/96T Sus scrofa; Porcine (Pig)
11569 轉(zhuǎn)化生長因子β3(TGFβ3)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Transforming Growth Factor Beta 3 (TGFb3) 48T/96T Rattus norvegicus (Rat)
11570 轉(zhuǎn)化生長因子β誘導(dǎo)蛋白(TGFβI)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Transforming Growth Factor Beta Induced Protein (TGFbI) 48T/96T Oryctolagus cuniculus (Rabbit)
11571 轉(zhuǎn)化生長因子β3(TGFβ3)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Transforming Growth Factor Beta 3 (TGFb3) 48T/96T Rhesus monkey (Simian)
11572 組織金屬蛋白酶抑制因子4(TIMP4)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Tissue Inhibitors Of Metalloproteinase 4 (TIMP4) 48T/96T Bos taurus; Bovine (Cattle)
11573 組織金屬蛋白酶抑制因子4(TIMP4)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Tissue Inhibitors Of Metalloproteinase 4 (TIMP4) 48T/96T Sus scrofa; Porcine (Pig)
11574 組織金屬蛋白酶抑制因子4(TIMP4)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Tissue Inhibitors Of Metalloproteinase 4 (TIMP4) 48T/96T Oryctolagus cuniculus (Rabbit)
11575 腫瘤壞死因子α(TNFα)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Tumor Necrosis Factor Alpha (TNFa) 48T/96T Capra hircus; Caprine (Goat)
11576 腫瘤壞死因子α(TNFα)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Tumor Necrosis Factor Alpha (TNFa) 48T/96T Equus caballus; Equine (Horse)
11577 腫瘤壞死因子β(TNFβ)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Tumor Necrosis Factor Beta (TNFb) 48T/96T Bos taurus; Bovine (Cattle)
11578 腫瘤壞死因子β(TNFβ)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Tumor Necrosis Factor Beta (TNFb) 48T/96T Canis familiaris; Canine (Dog)
11579 腫瘤壞死因子β(TNFβ)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Tumor Necrosis Factor Beta (TNFb) 48T/96T Sus scrofa; Porcine (Pig)
11580 腫瘤壞死因子β(TNFβ)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Tumor Necrosis Factor Beta (TNFb) 48T/96T Oryctolagus cuniculus (Rabbit)
11581 腫瘤壞死因子β(TNFβ)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Tumor Necrosis Factor Beta (TNFb) 48T/96T Rhesus monkey (Simian)
11582 胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白3(IGFBP3)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Insulin Like Growth Factor Binding Protein 3 (IGFBP3) 48T/96T Bos taurus; Bovine (Cattle)
11583 胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白3(IGFBP3)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Insulin Like Growth Factor Binding Protein 3 (IGFBP3) 48T/96T Capra hircus; Caprine (Goat)
11584 胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白3(IGFBP3)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Insulin Like Growth Factor Binding Protein 3 (IGFBP3) 48T/96T Equus caballus; Equine (Horse)
11585 胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白3(IGFBP3)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Insulin Like Growth Factor Binding Protein 3 (IGFBP3) 48T/96T Danio rerio (Zebrafish)
11586 胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白3(IGFBP3)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Insulin Like Growth Factor Binding Protein 3 (IGFBP3) 48T/96T Chicken (Gallus)
11587 胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白4(IGFBP4)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Insulin Like Growth Factor Binding Protein 4 (IGFBP4) 48T/96T Bos taurus; Bovine (Cattle)
11588 胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白4(IGFBP4)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Insulin Like Growth Factor Binding Protein 4 (IGFBP4) 48T/96T Capra hircus; Caprine (Goat)
11589 胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白4(IGFBP4)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Insulin Like Growth Factor Binding Protein 4 (IGFBP4) 48T/96T Chicken (Gallus)
11590 胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白4(IGFBP4)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Insulin Like Growth Factor Binding Protein 4 (IGFBP4) 48T/96T Sus scrofa; Porcine (Pig)
11591 Ⅰ型膠原α2(COL1α2)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Collagen Type I Alpha 2 (COL1a2) 48T/96T Bos taurus; Bovine (Cattle)
11592 蛋白C(PROC)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Protein C (PROC) 48T/96T Mus musculus (Mouse)
11593 蛋白C(PROC)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Protein C (PROC) 48T/96T Rattus norvegicus (Rat)
11594 Ⅳ型膠原α1(COL4α1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Collagen Type IV Alpha 1 (COL4a1) 48T/96T Homo sapiens (Human)
11595 外皮蛋白(EVPL)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Envoplakin (EVPL) 48T/96T Homo sapiens (Human)
11596 通用轉(zhuǎn)錄因子ⅡH肽1(GTF2H1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) ELISA Kit for General Transcription Factor IIH, Polypeptide 1 (GTF2H1) 48T/96T Mus musculus (Mouse)
11597 單核細胞趨化蛋白4(MCP4)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Monocyte Chemotactic Protein 4 (MCP4) 48T/96T Canis familiaris; Canine (Dog)
11598 單核細胞趨化蛋白4(MCP4)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Monocyte Chemotactic Protein 4 (MCP4) 48T/96T Equus caballus; Equine (Horse)
11599 *型纖溶酶原激活因子受體(uPAR)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Plasminogen Activator, Urokinase Receptor (uPAR) 48T/96T Bos taurus; Bovine (Cattle)
11600 *型纖溶酶原激活因子受體(uPAR)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Plasminogen Activator, Urokinase Receptor (uPAR) 48T/96T Rhesus monkey (Simian)
11601 血小板生成素(TPO)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Thrombopoietin (TPO) 48T/96T Bos taurus; Bovine (Cattle)
11602 血小板生成素(TPO)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Thrombopoietin (TPO) 48T/96T Canis familiaris; Canine (Dog)
11603 血小板生成素(TPO)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Thrombopoietin (TPO) 48T/96T Chicken (Gallus)

下面我們分析Elisa試驗操作中可能影響結(jié)果的原因，并給出相應(yīng)的解決辦法：
1 選擇試劑：選擇質(zhì)量優(yōu)良的檢測試劑，嚴(yán)格按照試劑說明書進行操作，操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
2 加樣：可能原因： 
1）血清或血漿標(biāo)本分離不好即進行加樣； 
2）手工操作中，加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時間過長(特別是室內(nèi)溫度較高時)； 3）加完標(biāo)本再加酶試劑時酶濺出孔外。
解決辦法： 
1） 標(biāo)本為血清：將血液先自然存放1-2小時后，再用3000rmp離心15分鐘；標(biāo)本為血漿：必須使用含抗凝劑的血液標(biāo)本收集管，采血后必須立即顛倒*混合5-10次，放置一段時間后，3000rpm離心15分鐘；若在幾天內(nèi)檢測，可放在2-8℃冰箱中，若要貯存，則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。 
2) 加樣后及時放入孵箱。 
3) 加酶試劑后用吸水紙在酶標(biāo)板表面輕拭吸干。 
4) 如果采用AT或其他全自動加樣，選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。 
5) 標(biāo)本較多時，請分批操作。
3 孵育：可能原因： 
1) 孵育時未貼封片或加蓋，使標(biāo)本或稀釋液蒸發(fā)，吸附于孔壁，難于清洗*； 
2) 孵育時間人為延長，導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周圍，難以清洗*。解決辦法： 
1) 貼封片或加蓋； 
2) 按說明步驟嚴(yán)格控制操作時間。
4 洗板：可能原因： 
1) 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。 
2) 采用半自動洗板機洗板時，洗液量不足，導(dǎo)致洗板不*；洗板針堵塞，抽吸不*；洗板不暢，導(dǎo)致洗板效果差。 
3) 反應(yīng)板過多造成洗板等待時間長。 解決辦法： 
1) 保證洗液注滿各孔，洗板針暢通，洗完板后在吸水紙（選擇干凈、無或少塵的吸水材料）上輕輕拍干； 
2) 合理安排，或多用幾臺洗板機。
5顯色：可能原因： 
1) 顯色劑配制后放置時間過長或使用過期顯色劑； 
2) 加顯色劑時濺出孔外造成液體回流。解決辦法： 
1) 顯色劑盡量在臨用前配制，堅持不用過期顯色劑，肉眼可見淺藍色的TMB顯色劑不用； 2) 加樣時保持顯色劑不外流； 
3) A、B液應(yīng)避免接觸金屬器械。
6 終止：可能原因如加終止液時產(chǎn)生較多氣泡，導(dǎo)致假陽性增加。所以在加終止液時應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡。
7 讀板：如讀板時板底不清潔等。應(yīng)保證酶標(biāo)板清潔。
所以在整個操作過程中保證酶標(biāo)板不接觸次氯酸; 盡可能實現(xiàn)ELISA檢測標(biāo)準(zhǔn)自動化，有效提高檢測質(zhì)量。
在實際操作中，除了選擇優(yōu)良試劑外，必須嚴(yán)格按照操作步驟進行操作，同時作好室內(nèi)質(zhì)控、室間質(zhì)評，以嚴(yán)謹(jǐn)?shù)墓ぷ髯黠L(fēng)檢測每一份標(biāo)本，才能保證檢測質(zhì)量?，F(xiàn)在國內(nèi)已有相當(dāng)數(shù)量的單位擁有全自動酶標(biāo)儀，這對于實現(xiàn)ELISA標(biāo)準(zhǔn)化檢測、提高檢測質(zhì)量起到了重要作用。
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