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上海紀寧酶聯(lián)科技有限公司
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更新時間:2017-02-22 11:08:15瀏覽次數(shù):211次
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兔子皮質(zhì)酮/腎上腺酮(CORT)ELISA試劑盒,ELISA試驗以靈敏度較高、特異性較好的特點在酶聯(lián)免疫實驗得到了廣泛的應(yīng)用,但操作中的各個環(huán)節(jié)對試驗的檢測效果影響較大,如不注意,有可能導(dǎo)致顯色不全、花板等結(jié)果。
兔子皮質(zhì)酮/腎上腺酮(CORT)ELISA試劑盒實驗ELISA結(jié)果判定常用的幾種方法:
1)目測定性法:加入底物經(jīng)酶解和終止反應(yīng)后,肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競爭法則淺于)陰性對照;與陰性對照的顏色接近者,判定為陰性。
2)以樣品孔的OD值大于陰性對照OD值+2~3SD,作為陽性結(jié)果的閾值。
3)以P/N值(陽性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽性;P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑;P/N小于1.5為陰性。
4)定量測定結(jié)果根據(jù)標準曲線計算樣品中待測物的含量。
我們將在兔子皮質(zhì)酮/腎上腺酮(CORT)ELISA試劑盒操作中各個環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問題的原因及解決辦法總結(jié)于下,以期給客戶帶來一些啟發(fā),提高試驗質(zhì)量。
6490 人多聚血清蛋白(PHSA)ELISA Kit,48T/96T
6491 人非神經(jīng)元性烯醇化酶(NNE)ELISA Kit,48T/96T
6492 人蛋白酶3特異性抗中性粒細胞胞質(zhì)抗體(PR3-ANCA)
6493 人黑色素細胞刺激素(MSH)ELISA Kit,48T/96T
6494 人巨噬細胞趨化因子(MCF)ELISA Kit,48T/96T
6495 人葡萄球菌蛋白A(SPA)ELISA Kit,48T/96T
6496 人*羥化酶(TH)ELISA Kit,48T/96T
6497 人葡萄糖氧化酶(GOD)ELISA Kit,48T/96T
6498 人普通急性淋巴細胞白血病抗原(CALLA)ELISA Kit,48T/96T
6499 人膜攻擊復(fù)合物(MAC)ELISA Kit,48T/96T
6500 人胎盤催乳素(HPL)ELISA Kit,48T/96T
6501 人胎盤蛋白(PP)ELISA Kit,48T/96T
6502 人胎盤核糖核酸抑止劑(HPRI)ELISA Kit,48T/96T
6503 人胃泌素細胞抗體(GCA)ELISA Kit,48T/96T
6504 人纖維連接素相關(guān)抗原(FRA)ELISA Kit,48T/96T
6505 人乙酰*酯酶(ChE)ELISA Kit,48T/96T
6506 人鞭毛蛋白(flagellin)ELISA Kit,48T/96T
6507 人α烯醇化酶(α-enolase)ELISA Kit,48T/96T
6508 人不透光相關(guān)蛋白(OPAs)ELISA Kit,48T/96T
6509 人重酒石酸*(NE-B)ELISA Kit,48T/96T
6510 人脂氧素A4(LXA4)ELISA Kit,48T/96T
6511 人胰脂肪酶(PL)ELISA Kit,48T/96T
6512 人胰*(PAMY)ELISA Kit,48T/96T
6513 人血管緊張肽酶(Angiotensinase)ELISA Kit,48T/96T
6514 人真胰島素(TI)ELISA Kit,48T/96T
6515 人抗*抗體(GM1)ELISA Kit,48T/96T
6516 人系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)ELISA Kit,48T/96T
6517 人尿微量白蛋白(ALB)ELISA Kit,48T/96T
6518 人抗核仁纖維蛋白抗體(AFA/snoRNP/U3RNP)ELISA Kit,48T/96T
6519 人天青殺素(AZU)ELISA Kit,48T/96T
6520 人生長激素釋放因子(GH-RF)ELISA Kit,48T/96T
6521 人軟骨糖蛋白39(HC gp-39)ELISA Kit,48T/96T
6522 人溶酶體相關(guān)膜蛋白2(HLAMP-2)ELISA Kit,48T/96T
6523 人脫氧膠原吡啶交聯(lián)(DPD)ELISA Kit,48T/96T
6524 人膠原吡啶交聯(lián)(PYD)ELISA Kit,48T/96T
6525 人羥基膠原吡啶交聯(lián)(OH-PYD)ELISA Kit,48T/96T
6526 人腫瘤壞死因子相關(guān)激活誘導(dǎo)因子(TRANCE)ELISA Kit,48T/96T
6527 人破骨細胞分化因子(ODF)ELISA Kit,48T/96T
6528 小鼠破骨細胞分化因子(ODF)ELISA Kit,48T/96T
6529 大鼠破骨細胞分化因子(ODF)ELISA Kit,48T/96T
6530 人螺旋肽(Helical Peptide)ELISA Kit,48T/96T
6531 人Ⅱ型膠原螺旋肽(HELIX-Ⅱ)ELISA Kit,48T/96T
6532 人堿性磷酸酶(ALP)ELISA Kit,48T/96T
6533 小鼠堿性磷酸酶(ALP)ELISA Kit,48T/96T
6534 大鼠堿性磷酸酶(ALP)ELISA Kit,48T/96T
6535 人基質(zhì)裂解素(ST3)ELISA Kit,48T/96T
6536 人基質(zhì)裂解素(ST2)ELISA Kit,48T/96T
6537 人基質(zhì)裂解蛋白(MAT)ELISA Kit,48T/96T
6538 人基質(zhì)裂解素(ST1)ELISA Kit,48T/96T
6539 人基質(zhì)γ羧基*蛋白(MGP)ELISA Kit,48T/96T
6540 人紅細胞刺激因子(ESF)ELISA Kit,兔子皮質(zhì)酮/腎上腺酮(CORT)ELISA試劑盒48T/96T
6541 人肝素結(jié)合性表皮生長因子(HB-EGF)ELISA Kit,48T/96T
6542 人甘露糖結(jié)合蛋白/甘露糖結(jié)合凝集素(MBP/MBL)
6543 人N鈣黏蛋白/神經(jīng)鈣黏蛋白(N-Cad)ELISA Kit,48T/96T
下面我們分析Elisa試驗操作中可能影響結(jié)果的原因,并給出相應(yīng)的解決辦法:
1 選擇試劑:選擇質(zhì)量優(yōu)良的檢測試劑,嚴格按照試劑說明書進行操作,操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
2 加樣:可能原因:
1)血清或血漿標本分離不好即進行加樣;
2)手工操作中,加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時間過長(特別是室內(nèi)溫度較高時); 3)加完標本再加酶試劑時酶濺出孔外。
解決辦法:
1) 標本為血清:將血液先自然存放1-2小時后,再用3000rmp離心15分鐘;標本為血漿:必須使用含抗凝劑的血液標本收集管,采血后必須立即顛倒*混合5-10次,放置一段時間后,3000rpm離心15分鐘;若在幾天內(nèi)檢測,可放在2-8℃冰箱中,若要貯存,則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。
2) 加樣后及時放入孵箱。
3) 加酶試劑后用吸水紙在酶標板表面輕拭吸干。
4) 如果采用AT或其他全自動加樣,選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。
5) 標本較多時,請分批操作。
3 孵育:可能原因:
1) 孵育時未貼封片或加蓋,使標本或稀釋液蒸發(fā),吸附于孔壁,難于清洗*;
2) 孵育時間人為延長,導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周圍,難以清洗*。解決辦法:
1) 貼封片或加蓋;
2) 按說明步驟嚴格控制操作時間。
4 洗板:可能原因:
1) 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。
2) 采用半自動洗板機洗板時,洗液量不足,導(dǎo)致洗板不*;洗板針堵塞,抽吸不*;洗板不暢,導(dǎo)致洗板效果差。
3) 反應(yīng)板過多造成洗板等待時間長。 解決辦法:
1) 保證洗液注滿各孔,洗板針暢通,洗完板后在吸水紙(選擇干凈、無或少塵的吸水材料)上輕輕拍干;
2) 合理安排,或多用幾臺洗板機。
5 兔子皮質(zhì)酮/腎上腺酮(CORT)ELISA試劑盒顯色:可能原因:
1) 顯色劑配制后放置時間過長或使用過期顯色劑;
2) 加顯色劑時濺出孔外造成液體回流。解決辦法:
1) 顯色劑盡量在臨用前配制,堅持不用過期顯色劑,肉眼可見淺藍色的TMB顯色劑不用; 2) 加樣時保持顯色劑不外流;
3) A、B液應(yīng)避免接觸金屬器械。
6 終止:可能原因如加終止液時產(chǎn)生較多氣泡,導(dǎo)致假陽性增加。所以在加終止液時應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡。
7 讀板:如讀板時板底不清潔等。應(yīng)保證酶標板清潔。
所以在整個操作過程中保證酶標板不接觸次氯酸; 盡可能實現(xiàn)ELISA檢測標準自動化,有效提高檢測質(zhì)量。
在實際操作中,除了選擇優(yōu)良試劑外,必須嚴格按照操作步驟進行操作,同時作好室內(nèi)質(zhì)控、室間質(zhì)評,以嚴謹?shù)墓ぷ髯黠L檢測每一份標本,才能保證檢測質(zhì)量?,F(xiàn)在國內(nèi)已有相當數(shù)量的單位擁有全自動酶標儀,這對于實現(xiàn)ELISA標準化檢測、提高檢測質(zhì)量起到了重要作用。
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