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上海紀(jì)寧酶聯(lián)科技有限公司
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更新時間:2017-01-26 21:40:27瀏覽次數(shù):185次
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兔子腫瘤壞死因子α(TNF-α) ELISA試劑盒,ELISA試驗以靈敏度較高、特異性較好的特點在酶聯(lián)免疫實驗得到了廣泛的應(yīng)用,但操作中的各個環(huán)節(jié)對試驗的檢測效果影響較大,如不注意,有可能導(dǎo)致顯色不全、花板等結(jié)果。
兔子腫瘤壞死因子α(TNF-α) ELISA試劑盒實驗ELISA結(jié)果判定常用的幾種方法:
1)目測定性法:加入底物經(jīng)酶解和終止反應(yīng)后,肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競爭法則淺于)陰性對照;與陰性對照的顏色接近者,判定為陰性。
2)以樣品孔的OD值大于陰性對照OD值+2~3SD,作為陽性結(jié)果的閾值。
3)以P/N值(陽性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽性;P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑;P/N小于1.5為陰性。
4)定量測定結(jié)果根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中待測物的含量。
我們將在兔子腫瘤壞死因子α(TNF-α) ELISA試劑盒操作中各個環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問題的原因及解決辦法總結(jié)于下,以期給客戶帶來一些啟發(fā),提高試驗質(zhì)量。
4944 人15脂加氧酶(15-LO/LOX)ELISA Kit,48T/96T
4945 小鼠15脂加氧酶(15-LO/LOX)ELISA Kit,48T/96T
4946 大鼠15脂加氧酶(15-LO/LOX)ELISA Kit,48T/96T
4947 人骨膠原交聯(lián)(Cr)ELISA Kit,48T/96T
4948 小鼠骨膠原交聯(lián)(Cr)ELISA Kit,48T/96T
4949 大鼠骨膠原交聯(lián)(Cr)ELISA Kit,48T/96T
4950 兔子骨膠原交聯(lián)(Cr)ELISA Kit,48T/96T
4951 人Ⅰ型前膠原C末端肽(CⅠCP)ELISA Kit,48T/96T
4952 小鼠Ⅰ型前膠原C末端肽(CⅠCP)ELISA Kit,48T/96T
4953 大鼠Ⅰ型前膠原C末端肽(CⅠCP)ELISA Kit,48T/96T
4954 人脫氧吡啶酚/脫氧吡啶啉(DPD)ELISA Kit,48T/96T
4955 小鼠脫氧吡啶酚/脫氧吡啶啉(DPD)ELISA Kit,48T/96T
4956 大鼠脫氧吡啶酚/脫氧吡啶啉(DPD)ELISA Kit,48T/96T
4957 兔子脫氧吡啶酚/脫氧吡啶啉(DPD)ELISA Kit,48T/96T
4958 犬胰島素受體β(ISR-β)ELISA Kit,48T/96T
4959 人胰島素受體β(ISR-β)ELISA Kit,48T/96T
4960 小鼠胰島素受體β(ISR-β)ELISA Kit,48T/96T
4961 大鼠胰島素受體β(ISR-β)ELISA Kit,48T/96T
4962 人半*蛋白酶抑制劑/胱抑素C(Cys-C)ELISA Kit,48T/96T
4963 小鼠半*蛋白酶抑制劑/胱抑素C(Cys-C)ELISA Kit,48T/96T
4964 大鼠半*蛋白酶抑制劑/胱抑素C(Cys-C)ELISA Kit,48T/96T
4965 兔半*蛋白酶抑制劑/胱抑素C(Cys-C)ELISA Kit,48T/96T
4966 人糖化血紅蛋白A1c(GHbA1c)ELISA Kit,48T/96T
4967 小鼠糖化血紅蛋白A1c(GHbA1c)ELISA Kit,48T/96T
4968 大鼠糖化血紅蛋白A1c(GHbA1c)ELISA Kit,48T/96T
4969 兔糖化血紅蛋白A1c(GHbA1c)ELISA Kit,48T/96T
4970 人吡啶交聯(lián)物(PY)ELISA Kit,48T/96T
4971 小鼠吡啶交聯(lián)物(PY)ELISA Kit,48T/96T
4972 大鼠吡啶交聯(lián)物(PY)ELISA Kit,48T/96T
4973 兔吡啶交聯(lián)物(PY)ELISA Kit,48T/96T
4974 犬骨橋素(OPN)ELISA Kit,48T/96T
4975 人骨橋素(OPN)ELISA Kit,48T/96T
4976 小鼠骨橋素(OPN)ELISA Kit,48T/96T
4977 大鼠骨橋素(OPN)ELISA Kit,48T/96T
4978 兔骨橋素(OPN)ELISA Kit,48T/96T
4979 犬γ氨基丁酸(GABA)ELISA Kit,48T/96T
4980 人γ氨基丁酸(GABA)ELISA Kit,48T/96T
4981 小鼠γ氨基丁酸(GABA)ELISA Kit,48T/96T
4982 大鼠γ氨基丁酸(GABA)ELISA Kit,48T/96T
4983 人兒茶酚胺(CA)ELISA Kit,48T/96T
4984 小鼠兒茶酚胺(CA)ELISA Kit,48T/96T
4985 大鼠兒茶酚胺(CA)ELISA Kit,48T/96T
4986 兔兒茶酚胺(CA)ELISA Kit,48T/96T
4987 人抗酒石酸酸性磷酸酶5b(TRACP-5b)ELISA Kit,48T/96T
4988 小鼠抗酒石酸酸性磷酸酶5b(TRACP-5b)ELISA Kit,48T/96T
4989 大鼠抗酒石酸酸性磷酸酶5b(TRACP-5b)ELISA Kit,48T/96T
4990 人淋巴細(xì)胞功能相關(guān)抗原3(LFA-3/CD58)ELISA Kit,48T/96T
4991 小鼠淋巴細(xì)胞功能相關(guān)抗原3(LFA-3/CD58)ELISA Kit,48T/96T
4992 大鼠淋巴細(xì)胞功能相關(guān)抗原3(LFA-3/CD58)ELISA Kit,48T/96T
4993 兔淋巴細(xì)胞功能相關(guān)抗原3(LFA-3/CD58)ELISA Kit,48T/96T
4994 人前列腺素E1(PGE1)ELISA Kit,兔子腫瘤壞死因子α(TNF-α) ELISA試劑盒48T/96T
4995 小鼠前列腺素E1(PGE1)ELISA Kit,48T/96T
4996 大鼠前列腺素E1(PGE1)ELISA Kit,48T/96T
4997 兔子前列腺素E1(PGE1)ELISA Kit,48T/96T
下面我們分析Elisa試驗操作中可能影響結(jié)果的原因,并給出相應(yīng)的解決辦法:
1 選擇試劑:選擇質(zhì)量優(yōu)良的檢測試劑,嚴(yán)格按照試劑說明書進(jìn)行操作,操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
2 加樣:可能原因:
1)血清或血漿標(biāo)本分離不好即進(jìn)行加樣;
2)手工操作中,加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時間過長(特別是室內(nèi)溫度較高時); 3)加完標(biāo)本再加酶試劑時酶濺出孔外。
解決辦法:
1) 標(biāo)本為血清:將血液先自然存放1-2小時后,再用3000rmp離心15分鐘;標(biāo)本為血漿:必須使用含抗凝劑的血液標(biāo)本收集管,采血后必須立即顛倒*混合5-10次,放置一段時間后,3000rpm離心15分鐘;若在幾天內(nèi)檢測,可放在2-8℃冰箱中,若要貯存,則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。
2) 加樣后及時放入孵箱。
3) 加酶試劑后用吸水紙在酶標(biāo)板表面輕拭吸干。
4) 如果采用AT或其他全自動加樣,選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。
5) 標(biāo)本較多時,請分批操作。
3 孵育:可能原因:
1) 孵育時未貼封片或加蓋,使標(biāo)本或稀釋液蒸發(fā),吸附于孔壁,難于清洗*;
2) 孵育時間人為延長,導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周圍,難以清洗*。解決辦法:
1) 貼封片或加蓋;
2) 按說明步驟嚴(yán)格控制操作時間。
4 洗板:可能原因:
1) 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。
2) 采用半自動洗板機(jī)洗板時,洗液量不足,導(dǎo)致洗板不*;洗板針堵塞,抽吸不*;洗板不暢,導(dǎo)致洗板效果差。
3) 反應(yīng)板過多造成洗板等待時間長。 解決辦法:
1) 保證洗液注滿各孔,洗板針暢通,洗完板后在吸水紙(選擇干凈、無或少塵的吸水材料)上輕輕拍干;
2) 合理安排,或多用幾臺洗板機(jī)。
5兔子腫瘤壞死因子α(TNF-α) ELISA試劑盒顯色:可能原因:
1) 顯色劑配制后放置時間過長或使用過期顯色劑;
2) 加顯色劑時濺出孔外造成液體回流。解決辦法:
1) 顯色劑盡量在臨用前配制,堅持不用過期顯色劑,肉眼可見淺藍(lán)色的TMB顯色劑不用; 2) 加樣時保持顯色劑不外流;
3) A、B液應(yīng)避免接觸金屬器械。
6 終止:可能原因如加終止液時產(chǎn)生較多氣泡,導(dǎo)致假陽性增加。所以在加終止液時應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡。
7 讀板:如讀板時板底不清潔等。應(yīng)保證酶標(biāo)板清潔。
所以在整個操作過程中保證酶標(biāo)板不接觸次氯酸; 盡可能實現(xiàn)ELISA檢測標(biāo)準(zhǔn)自動化,有效提高檢測質(zhì)量。
在實際操作中,除了選擇優(yōu)良試劑外,必須嚴(yán)格按照操作步驟進(jìn)行操作,同時作好室內(nèi)質(zhì)控、室間質(zhì)評,以嚴(yán)謹(jǐn)?shù)墓ぷ髯黠L(fēng)檢測每一份標(biāo)本,才能保證檢測質(zhì)量?,F(xiàn)在國內(nèi)已有相當(dāng)數(shù)量的單位擁有全自動酶標(biāo)儀,這對于實現(xiàn)ELISA標(biāo)準(zhǔn)化檢測、提高檢測質(zhì)量起到了重要作用。
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