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技術(shù)文章

2015年羊ELISA試劑盒檢測未知抗體的間接法

閱讀：338發(fā)布時間：2015-1-14

1.用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1～10μg/ml，每孔加0.1ml，4℃過夜；

2.次日洗滌3次；

3.加一定稀釋的待檢樣品（未知抗體）0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,置37℃孵育1小時,洗滌；

4.（同時做空白、陰性及陽性孔對照）于反應(yīng)孔中，羊ELISA試劑盒加入新鮮稀釋的酶標第二抗體（抗抗體）0.1ml；

5.37℃孵育30-60分鐘，洗滌；

6.羊ELISA試劑盒zui后一遍用DDW洗滌。

7.加底物液顯色：于各反應(yīng)孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃10～30分鐘。

8.終止反應(yīng)：于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml。

9.結(jié)果判定：可于白色背景上，直接用肉眼觀察結(jié)果：羊ELISA試劑盒反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深，陽性程度越強，陰性反應(yīng)為無色或極淺，依據(jù)所呈顏色的深淺，以“+"、“-"號表示。也可測OD值：在ELISA檢測儀上，于450nm（若以ABTS顯色，則410nm）處，以空白對照孔調(diào)零后測各孔OD值，若大于規(guī)定的陰性對照OD值的2.1倍，即為陽性。


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