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閱讀:214發(fā)布時(shí)間:2014-4-21
血清的熱滅活是很多培養(yǎng)者感興趣的話題題,價(jià)格不菲的血清中含有諸如生長因子,維生素,等珍貴物質(zhì),而將它們置于50℃以上的溫度長達(dá)30分鐘是*沒有必要的。
盡管如此,在大多數(shù)實(shí)驗(yàn)室之中血清的熱滅活還是作為常規(guī)來執(zhí)行,多數(shù)實(shí)驗(yàn)者并沒有考慮熱處理對(duì)血清中的生長因子,氨基酸等成分帶來的負(fù)面影響,在我們的技術(shù)中zui常被提到的就是否該對(duì)血清進(jìn)行熱滅活,下面我們就對(duì)胎牛血清的熱滅活進(jìn)行一些探討和解釋。
熱滅活目的是為了去除血清中補(bǔ)體等對(duì)熱敏感的物質(zhì),但是在胎牛血清中對(duì)補(bǔ)體的滅活則明顯沒有必要。Triglia和Linscott曾對(duì)商業(yè)胎牛血清中的補(bǔ)體成分進(jìn)行測定,他們發(fā)現(xiàn)胎牛血清中含有的C1,C6僅達(dá)成年動(dòng)物血清的1-3%,而其它補(bǔ)體成分僅有成年動(dòng)物的5-50%,至于補(bǔ)體的主要成分C3在胎牛血清中則幾乎不能檢出。通過補(bǔ)體固定實(shí)驗(yàn),我們也在多個(gè)不同批次的胎牛血清中獲得了相似的結(jié)果。即使是在未稀釋的血清中,也未發(fā)現(xiàn)有明顯的溶血現(xiàn)象。另外,多數(shù)實(shí)驗(yàn)室在培養(yǎng)前將培養(yǎng)液進(jìn)行預(yù)熱的過程,也對(duì)熱敏的補(bǔ)體有滅活的作用。
根據(jù)調(diào)查,至少70%的研究者對(duì)血清的滅活僅僅是因?yàn)樽裾粘R?guī)操作,或者說認(rèn)為是理所當(dāng)然的。常規(guī)滅活建議的溫度在45℃到62℃之間,而時(shí)間則從15分鐘到60分鐘不等.其中zui常用的手法是56℃熱處理30分鐘。隨著血清采集、處理、加工工藝的提高,許多早先認(rèn)為是熱滅活的原因已經(jīng)不再成立,只有少數(shù)對(duì)血清進(jìn)行熱滅活的研究者在實(shí)驗(yàn)中證實(shí)了這一步驟的有效性和必要性。
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