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聯(lián)系我時(shí),請(qǐng)告知來(lái)自 智慧城市網(wǎng)免疫學(xué)技術(shù)正沿著基礎(chǔ)研究-應(yīng)用研究-高技術(shù)開(kāi)發(fā)研究3條主線在開(kāi)展,上海撫生生物促卵泡刺激素受體抗原正推動(dòng)著技術(shù)平臺(tái)的發(fā)展。
促卵泡刺激素受體抗原動(dòng)物體內(nèi)單抗的方法迄今為止,通常情況下均采用動(dòng)物體內(nèi)單抗的方法,鑒于絕大多數(shù)動(dòng)物用雜交瘤均由BALB/c小鼠的骨髓瘤細(xì)胞與同品系的脾細(xì)胞融合而得,因此使用的動(dòng)物當(dāng)然*BALB/c小鼠。本方法即將雜交瘤細(xì)胞接種于小鼠腹腔內(nèi),在小鼠腹腔內(nèi)生長(zhǎng)雜交瘤,并產(chǎn)生腹水,因而可得到大量的腹水單抗且抗體濃度很高。可見(jiàn)該法操作簡(jiǎn)便、經(jīng)濟(jì),不過(guò),腹水中常混有小鼠的各種雜蛋白(包括Ig),因此在很多情況下要提純后才能使用,而且還有污染動(dòng)物病毒的危險(xiǎn),故而用SPF級(jí)小鼠。
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anti-CSP (circumsporozoite protein/Plasmodium yoelii)??環(huán)子孢子蛋白(約氏瘧原蟲(chóng))抗原
CTn1 (cardiac troponin 1)??心肌肌鈣蛋白
cx3cl1(chemokine (C-X3-C motif) ligand 1)??趨化因子(C-X3-C 基元)配體1抗原
Cyclin A??周期素A抗原
HCMV UL49(Human Cytomegalovirus UL49 Gene) ??人巨細(xì)胞病毒UL49抗原
HCMV UL23/HHV5 UL23(Human Cytomegalovirus UL23 Gene)??人巨細(xì)胞病毒UL23抗原
DAD1 (dopamine D1 receptor)??多巴胺受體-D1抗原
Dysbindin/rhogap92b??精神分裂癥易感基因抗原
EBNA-3 (EpsteinBarr nuclear antigens 3)??EB病毒編碼核蛋白-3(抗原)
Emp1 (epithelial membrane protein 1)??表皮膜蛋白1抗原
Fibulin 1??衰老關(guān)鍵蛋白抗原
Measles virus of fusion protein??麻疹病毒抗原(麻疹病毒融合蛋白)
FSH-R(Follicle-stimulating hormone receptor precursor)??
GDNF (Glial cell line-derived neurotrphic factor)??膠質(zhì)細(xì)胞源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子抗原
GFP (Green Fluorecent protein)??綠色熒光蛋白多肽抗原
A、材料:a. 成年BALB/c小鼠。b. 降植烷(Pristane)或液體石蠟。c. 處于對(duì)數(shù)生*的雜交瘤細(xì)胞。
B、方法:a. 腹腔接種降植烷或液體石蠟,每只小鼠0.3-0.5ml。b. 7-10天后腹腔接種用PBS或無(wú)血清培養(yǎng)基稀釋的雜交瘤細(xì)胞,每只小鼠5×105/0.2ml。c. 間隔5天后,每天觀察小鼠腹水產(chǎn)生情況,如腹部明顯膨大,以手觸摸時(shí),皮膚有緊張感,即可用16號(hào)針頭采集腹水,一般可連續(xù)采2-3次,通常每只小鼠可采5-10ml腹水;d. 將腹水離心(2000r/min 5分鐘),除去細(xì)胞成分和其他的沉淀物,收集上清,測(cè)定抗體效價(jià),分裝,-70℃凍存?zhèn)溆茫騼龈杀4妗?br /> ?。?) 體外培養(yǎng)單抗的方法總體上講,雜交瘤細(xì)胞系并不是嚴(yán)格的貼壁依賴細(xì)胞(anchorage dependent cell,ADC),因此既可以進(jìn)行單層細(xì)胞培養(yǎng),又可以進(jìn)行懸浮培養(yǎng)。雜交瘤細(xì)胞的單層細(xì)胞培養(yǎng)法是各個(gè)實(shí)驗(yàn)室zui常用的手段,即將雜交瘤細(xì)胞加入培養(yǎng)瓶中,以含10-15%小牛血清的培養(yǎng)基培養(yǎng),細(xì)胞濃度以1×106-2×106/ml為佳,然后收集培養(yǎng)上清,其中單抗含量約10-50ug/ml。顯然,這種方法制備的單抗量極為有限,無(wú)疑是不適用于單抗的大規(guī)模。要想在體外大量制備單抗,就必須進(jìn)行雜交瘤細(xì)胞的大量(高密度)培養(yǎng)。單位體積內(nèi)細(xì)胞數(shù)量越多,細(xì)胞存活時(shí)間越長(zhǎng),單抗的濃度就越高,產(chǎn)量就越大。
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