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更新時間:2016-01-31 19:14:14瀏覽次數(shù):577次
聯(lián)系我時,請告知來自 智慧城市網(wǎng)磷酸酯酶-2Ac抗體經(jīng)過*實踐已經(jīng)發(fā)展的相當(dāng)成熟,在免疫學(xué)診斷中的應(yīng)用也相當(dāng)廣泛。
磷酸酯酶-2Ac抗體動物體內(nèi)單抗的方法迄今為止,通常情況下均采用動物體內(nèi)單抗的方法,鑒于絕大多數(shù)動物用雜交瘤均由BALB/c小鼠的骨髓瘤細(xì)胞與同品系的脾細(xì)胞融合而得,因此使用的動物當(dāng)然*BALB/c小鼠。本方法即將雜交瘤細(xì)胞接種于小鼠腹腔內(nèi),在小鼠腹腔內(nèi)生長雜交瘤,并產(chǎn)生腹水,因而可得到大量的腹水單抗且抗體濃度很高??梢娫摲ú僮骱啽?、經(jīng)濟(jì),不過,腹水中?;煊行∈蟮母鞣N雜蛋白(包括Ig),因此在很多情況下要提純后才能使用,而且還有污染動物病毒的危險,故而用SPF級小鼠。 磷酸酯酶-2Ac抗體A、材料:a. 成年BALB/c小鼠。b. 降植烷(Pristane)或液體石蠟。c. 處于對數(shù)生*的雜交瘤細(xì)胞。
B、方法:a. 腹腔接種降植烷或液體石蠟,每只小鼠0.3-0.5ml。b. 7-10天后腹腔接種用PBS或無血清培養(yǎng)基稀釋的雜交瘤細(xì)胞,每只小鼠5×105/0.2ml。c. 間隔5天后,每天觀察小鼠腹水產(chǎn)生情況,如腹部明顯膨大,以手觸摸時,皮膚有緊張感,即可用16號針頭采集腹水,一般可連續(xù)采2-3次,通常每只小鼠可采5-10ml腹水;d. 將腹水離心(2000r/min 5分鐘),除去細(xì)胞成分和其他的沉淀物,收集上清,測定抗體效價,分裝,-70℃凍存?zhèn)溆茫騼龈杀4妗?br /> 公司產(chǎn)品詳情請參閱有關(guān)詳細(xì)論述鏈接點擊:鮭魚精DNA溶液 1ml
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Bst DNA聚合酶(大片段) 800U
Pfu DNA聚合酶 100U
KOD DNA聚合酶
PCR級綠如藍(lán)染料 0.1ml
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dNTP溶液,10mM 0.5ml
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Taq DNA聚合酶緩沖液套裝 1套
PCR級MgCl2 即將推出
PCR級明膠溶液,2% 即將推出
PCR級DMSO 即將推出
MMLV逆轉(zhuǎn)錄酶 10000U
MMLV逆轉(zhuǎn)錄酶 50000U
AMV逆轉(zhuǎn)錄酶 200U
即用型PCR預(yù)配液 1.5ml
即用型PCR預(yù)配液 9ml
Taq DNA聚合酶抑制劑 0.3ml
體外培養(yǎng)單抗的方法總體上講,雜交瘤細(xì)胞系并不是嚴(yán)格的貼壁依賴細(xì)胞(anchorage dependent cell,ADC),因此既可以進(jìn)行單層細(xì)胞培養(yǎng),又可以進(jìn)行懸浮培養(yǎng)。雜交瘤細(xì)胞的單層細(xì)胞培養(yǎng)法是各個實驗室zui常用的手段,即將雜交瘤細(xì)胞加入培養(yǎng)瓶中,以含10-15%小牛血清的培養(yǎng)基培養(yǎng),細(xì)胞濃度以1×106-2×106/ml為佳,然后收集培養(yǎng)上清,其中單抗含量約10-50ug/ml。顯然,這種方法制備的單抗量極為有限,無疑是不適用于單抗的大規(guī)模。要想在體外大量制備單抗,就必須進(jìn)行雜交瘤細(xì)胞的大量(高密度)培養(yǎng)。單位體積內(nèi)細(xì)胞數(shù)量越多,細(xì)胞存活時間越長,單抗的濃度就越高,產(chǎn)量就越大。
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