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ELISA試劑盒告訴您HRP與抗體球蛋白結(jié)合起來用什么方法

閱讀：296發(fā)布時(shí)間：2015-2-9

ELISA理想的結(jié)合劑應(yīng)具備下列條件：

（1）不影響酶及抗體活性

（2）不產(chǎn)生干擾物質(zhì)

（3）抗體和酶結(jié)合后應(yīng)有較高的產(chǎn)量

（4）不出現(xiàn)非特異性反應(yīng)

（5）   結(jié)合程序簡(jiǎn)便

（6）來源易、價(jià)廉

目前常用的有戊二醛和過碘酸鈉二種。由于對(duì)所使用結(jié)合劑的針對(duì)性，因此標(biāo)記的方法也有戊二醛交聯(lián)法和過碘酸鈉氧化法兩類。
1、戊二醛交聯(lián)法：戊二醛是一種能使蛋白質(zhì)與蛋白質(zhì)聯(lián)結(jié)zui常用的雙功能試劑。它有2個(gè)對(duì)稱的活性醛基，可分別與酶蛋白和免疫球蛋白上的游離氨基（酚基、味唑基、巰基）以共價(jià)鍵邊接起來而形成的酶結(jié)合物。

過碘酸鈉氧化法：本法是目前酶標(biāo)記抗體較好的方法，能使70%酶與90%以上球蛋白結(jié)合。采用本法首先是用氟代二硝基苯（Fluoro dinitro bengene 2.4—硝基苯，F(xiàn)DNB）封閉HRP表面的游離氨基（亦可用甲醛或戊二醛來封閉），從而提高酶結(jié)合抗體球蛋白的能力，避免酶的自身交聯(lián)。然后用過碘酸鈉來氧化HRP表面結(jié)構(gòu)的醣鏈部份（即低聚醣基團(tuán)）使成醛基，使其直接與抗體球蛋白上的游離氨基形成共價(jià)鍵而結(jié)合。zui后用硼氫酸鈉還原，使HRP表面醛基能充分與抗體球蛋白上氨基進(jìn)行反應(yīng)，使之形成穩(wěn)定的結(jié)合物。


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