ELISA試劑盒、細胞培養(yǎng)上清液的說明書
檢測前準備工作:
1. 請?zhí)崆?0分鐘從冰箱中取出試劑盒，以平衡至室溫。
2. 將濃縮洗滌液用雙蒸水稀釋(1:20)。未用完的放回4℃。
3. 標準品: 加入標準品/標本稀釋液0.5ml至凍干標準品中，靜置15分鐘，待其充分溶解后，輕輕混勻(濃度為1000 pg/ml)。然后根據(jù)需要進行稀釋。(建議標準曲線使用以下濃度： 1000、500、250、125、62.5、31.25、15.6、0 pg/ml)。復溶標準品原液（1000 pg/ml）若未用完請分裝后放入-20℃以下電冰箱內保存，保存兩個月。已稀釋的標準品請廢棄。
4. *化抗體工作液：按當次試驗所需要得用量，使用前20分鐘，以*化抗體稀釋液稀釋濃縮*化抗體(1:30)成工作濃度。當日使用。若實驗次數(shù)過多導致*化 抗體量不足，可向我們公司單獨購買*化抗體。（須提供抗體批號）
5. 酶結合物工作液：按當次試驗所需要得用量，使用前20分鐘，以酶結合物稀釋液稀釋濃 縮酶結合物(1:30) 成工作濃度。當日使用。若實驗次數(shù)過多導致濃縮酶結合物量不足， 可向我們公司單獨購買濃縮酶結合物。（須提供酶結合物批號）
洗滌方法:
1. 自動洗板機：要求注入的洗滌液為350ul，注入與吸出間隔15－30秒。洗板5次。
2. 手工洗板：甩盡孔內液體，在潔凈的吸水紙上拍干，每孔加洗滌液350ul，靜置30秒后甩盡液體，在厚迭吸水紙上拍干。洗板5次。
操作步驟:
1．從已平衡至室溫的密封袋中取出試驗所需板條，未用的板條和干燥劑請放回鋁箔袋內壓 實自封條，密封口袋，放回4℃。
2．空白孔加標準品和標本稀釋液，其余相應孔中加標本或不同濃度標準品(100ul/孔)，用封板膠紙封住反應孔，36℃孵箱孵育90分鐘。
3．提前20分鐘準備*化抗體工作液。
4．洗板5次。
5．空白孔加*化抗體稀釋液，其余孔加入*化抗體工作液(100ul/孔)。用新封板膠紙封住反應孔，36℃孵箱孵育60分鐘。
6．提前20分鐘準備酶結合物工作液。避光室溫(22-25 ) ℃ 放置。
7．洗板5次。
8．空白孔加酶結合物稀釋液，其余孔加入酶結合物工作液(100ul/孔)。用新封板膠紙封住反應孔，36℃孵箱，避光孵育30分鐘。
9．打開酶標儀電源，預熱儀器，設置好檢測程序。
10．洗板5次。
11．加入顯色底物(TMB)100ul/孔，避光36℃孵箱，避光孵育15分鐘。
12．加入終止液100ul/孔, 混勻后即刻測量OD450值(3分鐘內)。在儀器保存讀數(shù)結果并打印一份紙質結果。
13．實驗完畢后將未用完的試劑按規(guī)定的保存溫度放回電冰箱保存至有效期結束。
建議保存酶標板框，以備下次或者今后試驗使用。
結果判斷:
1. 每個標準品和標本的OD值應減去空白孔的OD值。
2. 手工繪制標準曲線。以標準品濃度作橫坐標，OD值作縱坐標，以平滑線連接各標準品的坐標點。通過標本的OD值可在標準曲線上查出其濃度。
3. 若標本OD值高于標準曲線上限，應適當稀釋后重測，計算濃度時應乘以稀釋倍數(shù)。
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