⑴、細胞的成長狀況和密度ELISA試劑盒
從-70℃或-20℃甘油保留的菌種中直接轉(zhuǎn)接用于制備感受態(tài)細胞的菌液。不要用已
通過多次轉(zhuǎn)接，及貯存在4℃的培養(yǎng)菌液。細胞成長密度以每毫升培養(yǎng)液中的細胞數(shù)在5×107個擺布為佳。即使用對數(shù)期或?qū)?shù)成長前期的細菌，可通過測定培養(yǎng)液的OD600控制。對TG1菌株，OD600為0.5時，細胞密度在5×107個/ml擺布。(應留意OD600值與細胞數(shù)之間的隨菌株的不一樣而不一樣)。密度過高或不足均會使轉(zhuǎn)化率下降。
此外，受體細胞通常應是約束-潤飾體系缺陷的驟變株，即不含約束性內(nèi)切酶和甲基化酶的驟變株。而且受體細胞還應與所轉(zhuǎn)化的載體性質(zhì)相匹配。
⑵、質(zhì)粒dna的質(zhì)量和濃度
用于轉(zhuǎn)化的質(zhì)粒DNA應主要是超螺旋態(tài)的，轉(zhuǎn)化率與外源DNA的濃度在必定范圍內(nèi)成正比，但當參加的外源DNA的量過多或體積過大時，則會使轉(zhuǎn)化率下降。通常地，DNA溶液的體積不該超越感受態(tài)細胞體積的5%，1ng的cccDNA即可使50ul的感受態(tài)細胞到達飽和。
關于以質(zhì)粒為載體的重組分子而言，分子量大的轉(zhuǎn)化功率低，試驗證實，大于30kb的重組質(zhì)粒將很難進行轉(zhuǎn)化。此外，重組DNA分子的構(gòu)型與轉(zhuǎn)化功率也密切相關，環(huán)狀重組質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化率較分子量相同的線性重組質(zhì)粒高10~100倍，因而重組DNA大都構(gòu)成環(huán)狀雙螺旋分子。
⑶、試劑的質(zhì)量
所用的CaCl2等試劑均需是zui高純度的，并用zui純凈的水配制，分裝保留于4℃。
⑷、避免雜菌和雜DNA的污染
全部操作過程均應在無菌條件下進行，所用器皿，如離心管，移液槍*是新的，并經(jīng)高壓滅菌處理。一切的試劑都要滅菌，且留意避免被其它試劑、DNA酶或雜DNA所污染，不然均會影響轉(zhuǎn)化功率或雜DNA的轉(zhuǎn)入。
⑸、全部操作均需在冰上進行，不能脫離冰浴，不然細胞轉(zhuǎn)化率將會下降。
CDKN2B 細胞周期蛋白依賴性激酶抑制劑2B抗體
CRIPTO 畸胎瘤衍化生長因子單克隆抗體
CHFR 泛素連接酶蛋白CHFR抗體
Cullin 1 Cullin1抗體
Cofilin 肌動蛋白結(jié)合蛋白CFL抗體
CDMP1 軟骨衍生形態(tài)發(fā)生蛋白1抗體
Beta-casein β-酪蛋白抗體
c21orf63 21號染色體開放閱讀框63抗體
C4orf52 4號染色體開放閱讀框52抗體
C4orf40 4號染色體開放閱讀框40抗體
Cullin 3 Cullin3抗體
CDC40 細胞分裂周期同源蛋白40抗體
CCDC106 卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白106抗體
ELISA試劑盒
