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抗體的制備技術-抗血清制備

閱讀:277發(fā)布時間:2016-4-7

ELISA試劑盒

一、抗血清的制備 
有了質(zhì)量好的抗原,還必須選擇適當?shù)拿庖咄緩剑拍墚a(chǎn)生質(zhì)量好(特異性強和效價高)的抗體。 
(一)用于免疫的動物 
作免疫用的動物有哺乳類和禽類,主要為羊、馬、家兔、猴、豬、豚鼠、雞等,實驗室常用者為家兔、山羊和豚鼠等。動物種類的選擇主要根據(jù)抗原的生物學特性和所要獲得抗血清數(shù)量,如一般制備抗r-免疫球蛋白抗血清,多用家兔和山羊,因動物反應良好,而且能夠提供足夠數(shù)量的血清,用于免疫的動物應適齡,健壯,無感染性疾患,為ELISA試劑盒雄性,此外還需十分注意動物的飼養(yǎng),以消除動物的個體差異以及在免疫過程中死亡的影響。若用兔,用純種新西蘭兔,一組三只,兔的體重以2~3kg為宜。 
(二)免疫途徑 
免疫途徑有多種多樣,如靜脈內(nèi)、腹腔內(nèi)、肌肉內(nèi)、皮內(nèi)、皮下、淋巴結內(nèi)注射等,一般常用皮下或背部多點皮內(nèi)注射,每點注射0.1mL左右。途徑ELISA試劑盒的選擇決定于抗原的生物學特性和理化特性,如激素、酶、毒素等生物學活性抗原,一般不宜采用靜脈注射。 
(三)佐劑 
由于不同個體對同一抗原的反應性不同,而且不同抗原產(chǎn)生免疫反應的能力也有強有弱,因此常常在注射抗原的同時,加入能增強抗原的抗原性物質(zhì),以刺激機體產(chǎn)生較強的免疫反應,這種物質(zhì)稱為免疫佐劑。 
佐劑除了延長抗原在體內(nèi)的存留時間,增加抗原刺激作用外,更主要的是,它能刺激網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng),使參與免疫反應的免疫活性細胞增多,促進T細胞與B細胞的相互作用,從而增強機體對抗原的細胞免疫和抗體的產(chǎn)生。 
常用的佐劑是福氏佐劑(Freund adjuvant),其成分通常是羊毛脂1份、石臘油5份,羊毛脂與石臘油的比例,視需要可調(diào)整為1:2~9(V/V),這是不*福氏佐劑,在每毫升不*佐劑加入1~20mg卡介苗就成為*佐劑。 
配制方法:按比例將羊毛脂與石蠟油置容器內(nèi),用超聲波使之混勻,高壓滅菌,置4℃下保存?zhèn)溆?。免疫前取等容積*或不*佐劑與免疫原溶液混合,用振蕩器混勻成乳狀,也可以在免疫前取需要量佐劑置乳缽中研磨,均勻后再邊磨邊滴加入等容積抗原液(其中加卡介苗3~4mg/mL或不加),加完后再繼續(xù)研磨成乳劑,滴于冰水上5~10min內(nèi)*不擴散為止。為避免損失抗原,亦可用一注射器裝抗原液,另一注射器裝佐劑,二者以聚乙烯塑料管連接,然后二者來回反復抽吸,約數(shù)十分鐘后即能*乳化。檢查合格后即以其中一注射器作注射用。
BAI1    腦特異性血管生成抑制蛋白1抗體
BCLAF1    Bcl2相關轉(zhuǎn)錄因子抗體
BCNG1    腦環(huán)核苷酸門控通道蛋白1抗體
BRCC4    乳腺癌易感基因復合蛋白4抗體
Bub1    紡錘體檢查點蛋白抗體
BubR1    有絲分裂檢驗點蛋白BubR1抗體
BCAS3    乳腺癌相關蛋白3抗體
BCAS2    乳腺癌相關蛋白2抗體
BCAR1    乳腺癌抗雌激素耐藥蛋白1
BCAT1    胞漿支鏈氨基酸酸轉(zhuǎn)氨酶抗體
phospho-BCAR1(Tyr410)    磷酸化乳腺癌抗雌激素耐藥蛋白1抗體
BNIP3    促凋亡調(diào)節(jié)蛋白BNIP3抗體
BMPR2    骨形態(tài)發(fā)生蛋白2受體抗體
BRD8    甲狀腺激素受體共激活蛋白抗體
phospho-Bik(Thr33)    磷酸化促凋亡Bik蛋白抗體
BAP135    蛋白*激酶BAP135抗體
phospho-BAD (Ser75)    磷酸化相關死亡促進因子抗體

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