M13噬菌體
1、絲狀噬菌體M13噬菌體的生物學(xué)特性
⑴是單鏈閉合環(huán)狀噬菌體
只能感染雄性細(xì)菌，外形成絲狀，基因組DNA長約6.4kb，可分為10個(gè)區(qū)和507 bp基因間隔區(qū)（IS區(qū)），該區(qū)可以接受外源DNA的插入而不會(huì)影響到噬菌體的活力。這是該噬菌體能用于單鏈DNA載體的重要前提。ELISA試劑盒
⑵復(fù)制與增殖
2. M13噬菌體載體的構(gòu)建
⑴ 在IS區(qū)內(nèi)插入LacZ基因 ⑵在標(biāo)記基因區(qū)內(nèi)組裝MCS區(qū)段
ELISA試劑盒所以能通過a互補(bǔ)在X-Gal/ IPTG平板上識(shí)別重組體。這類載體包括了 M13mp8、9 和 M13mp18 、 19等
這類載體的突出優(yōu)點(diǎn)在于其既可以提供單鏈DNA，也可以提供雙鏈的DNA。其zui大的不足在于插入大的DNA片段后表現(xiàn)不穩(wěn)定，在噬菌體增殖過程中容易發(fā)生缺失。所以一般克隆的片段在1kb之內(nèi)，克隆300-400bp的片段十分穩(wěn)定。
柯斯質(zhì)粒載體
1.柯斯質(zhì)粒載體的特點(diǎn)
柯斯質(zhì)粒是一類人工構(gòu)建的含有l(wèi)DNA的cos序列和質(zhì)粒復(fù)制子的特殊類型的質(zhì)粒載體，cosmid是cos site carrying plasmid的縮寫。ELISA試劑盒
柯斯質(zhì)粒的大小為4-6kb，
由3部分組成：
A.多克隆位點(diǎn)區(qū)
B. 含有cos位點(diǎn)的lDNA區(qū)
C. 復(fù)制起始位點(diǎn)和抗性標(biāo)記區(qū)
2.柯斯質(zhì)粒載體的特性
1、具有l(wèi)噬菌體的特性 柯斯質(zhì)粒連接上適宜長度的外源DNA后可以在體外包裝成噬菌體顆粒，并能轉(zhuǎn)導(dǎo)寄主細(xì)胞。進(jìn)入寄主細(xì)胞的DNA也能環(huán)化和復(fù)制，但是不會(huì)形成新的噬菌體顆粒，也不能發(fā)生溶菌現(xiàn)象。
2、具有質(zhì)粒載體的特性 能象質(zhì)粒一樣在寄主細(xì)胞內(nèi)復(fù)制，且?guī)в锌剐赃x擇標(biāo)記基因，有些還帶有插入失活型的多克隆位點(diǎn)，為重組體的篩選提供了方便。ELISA試劑盒
3、高容量的克隆能力 cos質(zhì)粒本身很小，只有復(fù)制起點(diǎn)、選擇標(biāo)記和cos位點(diǎn)等構(gòu)成，所以其克隆上限可達(dá)45kb左右。不過由于包裝的限制，其克隆片段至少要達(dá)到30kb。
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