CIK草魚(yú)腎臟細(xì)胞 傳代方法：細(xì)胞*匯合時(shí)，倒掉舊液，加入消化液(0.25%*+0.03%EDTA)2ml消化，顯微鏡下觀察細(xì)胞*脫離瓶壁分離成單個(gè)細(xì)胞后棄掉*，加培養(yǎng)基混勻分瓶，T25瓶中加培養(yǎng)基至6-8ml，T75瓶加培養(yǎng)基至20ml，37℃，5%CO2孵箱培養(yǎng)。
郵購(gòu)備注： 收到細(xì)胞后，請(qǐng)鏡下觀察細(xì)胞，用恰當(dāng)方式處理細(xì)胞。若有懸浮的細(xì)胞，請(qǐng)離心收集細(xì)胞，接種到一個(gè)新的培養(yǎng)瓶中。使用新鮮配制的培養(yǎng)基，使用進(jìn)口胎牛血清，剛接到細(xì)胞時(shí)血清濃度可以在15％。本產(chǎn)品經(jīng)過(guò)了細(xì)菌、真菌、霉菌、病毒(HIV、HBV、HCV)、支原體檢測(cè)。
細(xì)胞復(fù)蘇的原則－快速融化：必須將凍存在-196℃液氮中的細(xì)胞快速融化至37℃，使細(xì)胞外凍存時(shí)的冰晶迅速融化，避免冰晶緩慢融化時(shí)進(jìn)入細(xì)胞形成再結(jié)晶，對(duì)細(xì)胞造成損害。
具體操作 (一)實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備： 1．將水浴鍋預(yù)熱至37℃ 2．用75％酒精擦拭紫外線照射30min的超凈工作臺(tái)臺(tái)面。 3．在超凈工作臺(tái)中按次序擺放好消過(guò)毒的離心管、吸管、培養(yǎng)瓶等等。
(二)取出凍存管： 1．根據(jù)細(xì)胞凍存記錄按標(biāo)簽找到所需細(xì)胞的編號(hào)。 2．從液氮罐中取出細(xì)胞盒，取出所需的細(xì)胞，同時(shí)核對(duì)管外的編號(hào)。
(三)迅速解凍： 1．迅速將凍存管投入到已經(jīng)預(yù)熱的水浴鍋中迅速解凍，并要不斷的搖動(dòng)，使管中的液體迅速融化。 2．約1-2min后凍存管內(nèi)液體*溶解，取出用酒精棉球擦拭凍存管的外壁，再拿入超凈臺(tái)內(nèi)。
(四)平衡離心：用架盤(pán)天平平衡后，放入離心機(jī)中3000r/min 離心3min。
(五)制備細(xì)胞懸液： 1．吸棄上清液。 2．向離心管內(nèi)加入10ml培養(yǎng)液，吹打制成細(xì)胞懸液。 (六)細(xì)胞計(jì)數(shù)： 細(xì)胞濃度以5×105/ml為宜。
(七)培養(yǎng)細(xì)胞 將復(fù)合細(xì)胞計(jì)數(shù)要求的細(xì)胞懸液分裝入培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)，將培養(yǎng)瓶放入37℃和5％CO2的培養(yǎng)箱內(nèi)2-4小時(shí)(或者24-48小時(shí))后換液繼續(xù)培養(yǎng)培養(yǎng)，換液的時(shí)間由細(xì)胞情況而定。
初學(xué)者易犯錯(cuò)誤： 1．水浴鍋未預(yù)熱或者未預(yù)熱到37℃。 2．水浴鍋內(nèi)凍存管太多，導(dǎo)致傳熱不佳，使融化時(shí)間延長(zhǎng)。 3．離心前忘記平衡，導(dǎo)致離心機(jī)損壞和細(xì)胞丟失。 4．一次復(fù)蘇細(xì)胞過(guò)多，忘記更換吸頭和吸管，導(dǎo)致細(xì)胞交叉污染。
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