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比色分析的基本原理

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  比色分析的基本原理
  
  比色分析是基于溶液對(duì)光的選擇性吸收而建立起來(lái)的一種分析方法,又稱(chēng)吸光光度法。
  
  有色物質(zhì)溶液的顏色與其濃度有關(guān)。溶液的濃度越大,顏色越深。利用光學(xué)比較溶液顏色的深度,可以測(cè)定溶液的濃度。
  
  根據(jù)吸收光的波長(zhǎng)范圍不同以及所使用的儀器精密程度,可分為光電比色法和分光光度法等。
  
  比色分析具有簡(jiǎn)單、快速、靈敏度高等特點(diǎn),廣泛應(yīng)用于微量組分的測(cè)定。通常中測(cè)定含量在10-1~10-4mg·L-1的痕量組分。比色分析如同其他儀器分析一樣,也具有相對(duì)誤差較大(一般為1%~5%)的缺點(diǎn)。但對(duì)于微量組分測(cè)定來(lái)說(shuō),由于誤差很小,測(cè)定結(jié)果也是令人滿(mǎn)意的。在現(xiàn)代儀器分析中,有60%左右采用或部分采用了這種分析方法。在醫(yī)學(xué)學(xué)科中,比色分析也被廣泛應(yīng)用于藥物分析、衛(wèi)生分析、生化分析等方面。
  
  一、物質(zhì)的顏色和光的關(guān)系
  
  光是一種電磁波。自然是由不同波長(zhǎng)(400~700nm)的電磁波按一定比例組成的混合光,通過(guò)棱鏡可分解成紅、橙、黃、綠、青、藍(lán)、紫等各種顏色相連續(xù)的可見(jiàn)光譜。如把兩種光以適當(dāng)比例混合而產(chǎn)生白光感覺(jué)時(shí),則這兩種光的顏色互為補(bǔ)色。圖8-1中處于同一直線(xiàn)關(guān)系的兩種色光(如綠與紫、黃與藍(lán))互為補(bǔ)色。
  
  當(dāng)白光通過(guò)溶液時(shí),如果溶液對(duì)各種波長(zhǎng)的光都不吸收,溶液就沒(méi)有顏色。如果溶液吸收了其中一部分波長(zhǎng)的光,則溶液就蜈現(xiàn)透過(guò)溶液后剩余部分光的顏色。例如,我們看到KMnO4溶液在白光下呈紫紅色,就是因?yàn)榘坠馔高^(guò)溶液時(shí),綠色光大部分被吸收,而其他各色都能透過(guò)。在透過(guò)的光中除紫紅色外都能兩兩互補(bǔ)成白色,所以KMnO4溶液呈現(xiàn)紫紅色。
  
  比色分析的基本原理同理,CuSO4溶液能吸收黃色光,所以溶液呈藍(lán)色。由此可見(jiàn),有色溶液的顏色是被吸收光顏色的補(bǔ)色。吸收越多,則補(bǔ)色的顏色越深。比較溶液顏色的深度,實(shí)質(zhì)上就是比較溶液對(duì)它所吸收光的吸收程度。表8-1列出了溶液的顏色與吸收光顏色的關(guān)系。
  
  表8-1溶液的顏色與吸收光顏色的關(guān)系
  
  溶液顏色綠黃橙紅紫紅紫藍(lán)青藍(lán)青吸收光顏色紫藍(lán)青藍(lán)青青綠綠黃橙紅波長(zhǎng)/nm400~450450~480480~490490~500500~560560~580580~600600~650650~760
  
  二、朗伯-比爾(Lambert-Beer)定律
  
  當(dāng)一束平行單色光(只有一種波長(zhǎng)的光)照射有色溶液時(shí),光的一部分被吸收,一部分透過(guò)溶液(圖8-2)。
  
  設(shè)入射光的強(qiáng)度為I0,溶液的濃度為c,液層的厚度為b,透射光強(qiáng)度為I,則
  
 ?。?-1)
  
  式中l(wèi)gI0/i表示光線(xiàn)透過(guò)溶液時(shí)被吸收的程度,一般稱(chēng)為吸光度(A)或消光度(E)。因此,上式又可寫(xiě)為:
  
  A=Kcb(8-2)
  
  上式為朗伯-比爾定律的數(shù)學(xué)表示式。它表示一束單色光通過(guò)溶液時(shí),溶液的吸光度與溶液的濃度和液層厚度的乘積成正比。
  
  式中,K為吸光系數(shù),當(dāng)溶液濃度c和液層厚度b的數(shù)值均為1時(shí),A=K,即吸光系數(shù)在數(shù)值上等于c和b均為1時(shí)溶液的吸光度。對(duì)于同一物質(zhì)和一定波長(zhǎng)的入射光而言,它是一個(gè)常數(shù)。
  
  比色法中常把稱(chēng)為透光度,用T表示,透光度和吸光度的關(guān)
  
  系如下:
  
 ?。?-3)
  
  當(dāng)c以mol·L-1為單位時(shí),吸光系數(shù)稱(chēng)為摩爾吸光系數(shù),用ε表示,其單位是L·mol-1·cm-1。當(dāng)c以質(zhì)量體積濃度(g·ml-1)表示時(shí),吸光系數(shù)稱(chēng)為百分吸光系數(shù),用E1%1cm表示,單位是ml·g-1·cm-1。吸光系數(shù)越大,表示溶液對(duì)入射光越容易吸收,當(dāng)c有微小變化時(shí)就可使A有較大的改變,故測(cè)定的靈敏度較高。一般ε值在103以上即可進(jìn)行比色分析。
  
  比色分析的基本原理如果測(cè)定某種物質(zhì)對(duì)不同波長(zhǎng)單色光的吸收程度,以波長(zhǎng)為橫坐標(biāo),吸光度為縱坐標(biāo)作圖可得一條曲線(xiàn),即物質(zhì)對(duì)光的吸收曲線(xiàn),可準(zhǔn)確地描述物質(zhì)對(duì)光的吸收情況。
  
  圖8-3是幾種不同濃度的KMnO4溶液的吸收曲線(xiàn),溶液對(duì)波長(zhǎng)525nm附近的綠光吸收量zui強(qiáng),而對(duì)其他波長(zhǎng)的光吸收較弱。光吸收程度zui大處的波長(zhǎng)叫做吸收波長(zhǎng),用λmax表示。不同濃度的KMnO4溶液所得的吸收曲線(xiàn),zui大吸收波長(zhǎng)都一致,只是相應(yīng)的光被吸收的程度不同。
  
  吸收曲線(xiàn)可作為比色分析中波長(zhǎng)選定的依據(jù),測(cè)定時(shí)一般選擇λmax的單色光作為入射光。這樣即使被測(cè)物質(zhì)含量較低也可得到較大的吸光度,因而可使分析的靈每度較高。
  
  若所測(cè)定的溶液無(wú)色,可在測(cè)定前加入適當(dāng)?shù)娘@色劑,通過(guò)與待測(cè)成分的化學(xué)反應(yīng)使溶液晱色即可測(cè)定此待測(cè)成分。
  
  例如,已知在525nm處KnO4溶液的ε=2235L·mol-1·cm-1,若用2cm比色皿,為使所測(cè)得的透光率介于20%~65%之間,溶液的濃度范圍應(yīng)是多少?

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