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技術(shù)文章

抗體常見(jiàn)問(wèn)題及解答

閱讀：241發(fā)布時(shí)間：2014-12-22

一、當(dāng)選擇一個(gè)肽用于免疫原，什么是重要的？
    答：通常蛋白的C端或N端是蛋白質(zhì)中暴露機(jī)會(huì)zui高的部分。另外，為了模仿蛋白的行為，合成的肽應(yīng)該有類似于蛋白質(zhì)“cut out off”后的結(jié)構(gòu)和電荷。因此：
    1. 來(lái)源于C端的多肽那么N端應(yīng)用乙?；揎?；
    2. 來(lái)源于N端的多肽那么C端應(yīng)用酰胺化修飾；
    3. 來(lái)源于內(nèi)部序列的多肽則需要肽的兩端都修飾。
二、什么樣的抗原(s)可以用于注射？
    答：天然蛋白，重組蛋白，多肽碳水化合物或其他微生物、細(xì)菌、病毒提取物可用于免疫接種，需要大小為5-10 kDa的小分子誘導(dǎo)充分的免疫反應(yīng)，有生物毒害的材料禁止用于免疫接種。上海恒遠(yuǎn)提示：
    1. 如果抗體作用于變性的靶標(biāo)蛋白，變性的抗原是。
    2. 如果使用的抗體的目標(biāo)蛋白質(zhì)是天然蛋白，非變性的抗原是。
    3. 并不是所有anti-peptide抗體都能識(shí)別天然蛋白質(zhì)，因此謹(jǐn)慎選擇肽序列是至關(guān)重要的。
    4. 通過(guò)重組蛋白在細(xì)菌表達(dá)體系誘導(dǎo)所制備的抗體在某些情況下無(wú)法識(shí)別天然蛋白質(zhì)。原因可能是在細(xì)菌細(xì)胞中表達(dá)的蛋白質(zhì)抗原發(fā)生錯(cuò)誤的折疊。不能保證用于任何的免疫反應(yīng)中都能得到很好的成功。
三、用于免疫接種的抗原需要多少量？
    答：這取決于抗原的免疫原性。在標(biāo)準(zhǔn)試驗(yàn)方案中，我們使用：大約500μg肽/動(dòng)物/15周齡，約400μg蛋白質(zhì)/動(dòng)物/15周齡。
    如果所選動(dòng)物抗原和抗體之間的關(guān)聯(lián)性較低，免疫接種時(shí)較少量的抗原(少于10μg)也是可以接受的。我們還可以使用自己的免疫方案。上海恒遠(yuǎn)提醒注意：如果蛋白質(zhì)需要濃縮，在某些情況下，在濃縮設(shè)備中蛋白會(huì)部分附著在膜上從而部分蛋白質(zhì)損失。
四、為什么抗原誘導(dǎo)反應(yīng)只會(huì)產(chǎn)生一些IgM抗體？
    答：由于缺乏T細(xì)胞刺激，高度保守的哺乳動(dòng)物蛋白質(zhì)的響應(yīng)往往很薄弱，主要導(dǎo)致IgM抗體的產(chǎn)生，不過(guò)，也有例外。如果是保守的哺乳動(dòng)物抗原，則使用親源關(guān)系遠(yuǎn)的物種。


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