ELISA法檢測(cè)立克次體
[檢測(cè)方法]ELISA法
[方法學(xué)原理， 將可溶Q熱立克次體吸附于固相載體上，洗去未吸附的抗原，加入待檢血清使其與載體上吸附的抗體連接，洗滌后加入酶標(biāo)記的抗人血清球蛋白，溫育后漂洗，加底物溶液，底物降解出現(xiàn)呈色反應(yīng)，顏色改變的程度與待檢血清的含量成正比。
[標(biāo)本準(zhǔn)備]
取新鮮末梢血或靜脈血。如采血后24h內(nèi)不能進(jìn)行試驗(yàn)，分離血清后將其保存于-20℃環(huán)境中。檢測(cè)時(shí)，使樣本恢復(fù)至室溫。
[試劑]
1．0．05mol／LpH 7．4 PBS-Tween-20
2．0．01mol／LpH 9．6碳酸鹽緩沖液
3．HRP標(biāo)記抗人球蛋白血清
4．鄰苯二胺底物溶液
5．2mol／L H2S04
6．純可溶性Ⅱ相Q熱立克次體抗原(制備方法見微量凝集試驗(yàn)檢測(cè)Q熱立克次體抗體)
[儀器) 酶標(biāo)儀或全自動(dòng)酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀。
(檢測(cè)步驟]
1．用0．05mol／LpH 9．6碳酸鹽緩沖液稀釋抗原使成每毫升含蛋白10／1g左右，包被酶標(biāo)板，每孔0．2ml，于37℃環(huán)境中2h后，于4℃環(huán)境中過(guò)夜。
2．用0．01mol／L pH 7．4 PBS-Tween—20洗3次，用于。
3．被檢血清經(jīng)含1g／L牛血清清蛋白的PBS-Tween-20作l：200稀釋，加人相應(yīng)孔中，同時(shí)加2孔已知陽(yáng)性對(duì)照和2孔陰性對(duì)照，放37℃環(huán)境中2h。
4．用0．Olmol／L pH 7．4 PBS-Tween—20洗3次，甩干。
5．加酶標(biāo)記抗體，每孔0．2ml，37℃環(huán)境中2h。
6．用0．01mol／L pH 7．4 PBS-Tween-20洗3次，甩干。
7．加底物溶液，每孔0．2ml，室溫避光保存15—30min，各孔加入2mol／l H2S04 1滴終止反應(yīng)，用酶標(biāo)光度計(jì)490nm測(cè)每孔吸光度值(A值)。
(正常參考值] Q熱立克次體抗體陰性
[注意事項(xiàng))
1．可溶性抗原必須純凈，否則影響結(jié)果。
2．每次試驗(yàn)應(yīng)同時(shí)做2份陽(yáng)性及2份陰性對(duì)照。
3．其他注意事項(xiàng)同檢測(cè)HBsAg的ELISA。
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