目前elisa試劑盒檢測(cè)的樣本中，除了細(xì)胞上清外，還有比較大的一部分是血清和血漿樣本。對(duì)于ELISA試劑盒客戶來說，在實(shí)驗(yàn)中可能用到不同的樣本，如何辨別所購(gòu)的ELISA試劑盒能否測(cè)手中的樣本呢？對(duì)于zui常見的細(xì)胞上清，我們大家知道，培養(yǎng)細(xì)胞過程中，無特別情況一般是10%的牛血清加入培養(yǎng)基中，經(jīng)過培養(yǎng)后，細(xì)胞的吸收消耗，zui后細(xì)胞上清中蛋白含量會(huì)很少，而且對(duì)于一般牛血清的來說，在過程中已經(jīng)去除了，所以對(duì)一般ELISA而言，不會(huì)影響抗體抗原的結(jié)合。
如沒有提供專門用于血清血漿樣本的緩沖液，那么只要用已知濃度的待測(cè)指標(biāo)蛋白加入所測(cè)種屬的血清作為樣本加樣和用已知濃度的待測(cè)指標(biāo)蛋白加入PBS緩沖液中同時(shí)檢測(cè)對(duì)比，ELISA試劑盒即可知道該試劑盒是否可以直接用來測(cè)血清血漿樣本。
如該種類型ELISA試劑盒樣本總量如為100μl的話，一般而言，會(huì)是50μl的樣本加樣量和50μl的特定的緩沖液。
在使用試劑盒的過程，可將已知濃度的蛋白用血清或血漿調(diào)配到試劑盒標(biāo)定的檢測(cè)限的值的2倍，加入50μl做兩孔，一孔補(bǔ)入常規(guī)的50μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液，ELISA試劑盒一孔補(bǔ)入50μl樣本分析緩沖液，即可區(qū)分出效果來，有時(shí)候，有些為了達(dá)到“消除"的效果，在樣本分析緩沖液中加入待測(cè)目標(biāo)蛋白，為了鑒別出這種情況，也可直接加入樣本分析緩沖液做一孔，同時(shí)做對(duì)比，這樣可試出試劑盒中的針對(duì)血清血漿樣本的緩沖液是否真的有效。
Elisa試劑盒的注意事項(xiàng)
1.試劑盒保存在2-8℃，使用前室溫平衡20 分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會(huì)有結(jié)晶，這屬于正?，F(xiàn)象，水浴加熱使結(jié)晶*溶解后再使用。
2.實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回自封袋中，密封(低溫干燥)保存。
3.嚴(yán)格按照說明書中標(biāo)明的時(shí)間、加液量及順序進(jìn)行溫育操作。
4.所有液體組分使用前充分搖勻。
按試劑盒說明書的要求準(zhǔn)備實(shí)驗(yàn)中需用的試劑。ELISA中用的蒸餾水或去離子水，包括用于洗滌的，應(yīng)為新鮮的和高質(zhì)量的。自配的緩沖液應(yīng)用pH計(jì)測(cè)量較正。從冰箱中取出的試驗(yàn)用試劑應(yīng)待溫度與室溫平衡后使用。試劑盒中本次試驗(yàn)不需用的部分應(yīng)及時(shí)放回冰箱保存。
試劑盒的配制：對(duì)于每種細(xì)胞因子應(yīng)仔細(xì)閱讀說明書，注意每批的細(xì)節(jié)。在使用細(xì)胞因子前，瞬時(shí)離心試劑瓶，盡可能多地收回其中的細(xì)胞因子。根據(jù)每批說明書中的細(xì)節(jié)，將凍干的細(xì)胞因子復(fù)溶。一般待測(cè)抗原標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性范圍的可通過將標(biāo)準(zhǔn)品做8次2倍系列稀釋從2000pg/ml到15pg/ml。可利用標(biāo)準(zhǔn)的ELISA操作流程、放大試劑盒、第三類試劑、或改變酶底物系統(tǒng)可在一定范圍內(nèi)提高靈敏度。為了優(yōu)化靈敏度，建議孵育標(biāo)準(zhǔn)品和標(biāo)本。若使用過氧化物酶作為顯色系統(tǒng)，應(yīng)嚴(yán)禁在洗液和稀釋液中加疊氮鈉，疊氮鈉可抑制過氧化物ELISA試劑盒酶的活性。
試劑盒的操作因固相載體的形成不同而有所差異，國(guó)內(nèi)醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)一般均用板式點(diǎn)。
ELISA試劑盒洗板方法：
手工洗板，吸去(不可觸及板壁)或甩掉酶標(biāo)板內(nèi)的液體;在實(shí)驗(yàn)臺(tái)上鋪墊幾層吸水紙，酶標(biāo)板朝下用力拍幾次;將推薦的洗滌緩沖液至少0.3ml注入孔內(nèi)，浸泡1-2分鐘，根據(jù)需要，重復(fù)此過程數(shù)次。
自動(dòng)洗板，如果有自動(dòng)洗板機(jī)，應(yīng)在熟練使用后再用到正式實(shí)驗(yàn)過程中。
EPHA10 *蛋白激酶受體A10抗體
EV71 polyprotein 3D 腸道病毒71型/手足口病病毒抗體
ELF1 轉(zhuǎn)錄因子ELF1抗體
Ephrin B3 *蛋白激酶B3抗體
phospho-EphB1+EphB2 (Tyr594) 磷酸化*蛋白激酶受體B1+B2抗體 EphB1+EphB2+EphB3+EphB4 *蛋白激酶受體B1+B2+B3+B4抗體 EMX2 空通氣孔樣蛋白2抗體
EN2 同源盒蛋白轉(zhuǎn)錄因子EN2抗體
phospho-ERK5 (Thr218 + Tyr220) 磷酸化細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶5抗體 ENTPD2 CD39樣蛋白1抗體
EIF5 真核翻譯起始因子5抗體
EBF2 早期B淋巴細(xì)胞因子2抗體
ELAVL2 ELAVL2蛋白抗體
ELAVL2 + ELAVL4 ELAVL2+ELAVL4蛋白抗體
會(huì)員1.png)