進(jìn)口ELISA試劑盒經(jīng)過多種試驗(yàn)結(jié)果已證實(shí)，熒光酶聯(lián)免疫救贖具有很高的敏感性，但是若掌握不好也可帶來很高的背景染色，可有多種因素影響到zui終產(chǎn)物的酶結(jié)合位點(diǎn)的沉積，這是因?yàn)檫@個沉積過程是一種復(fù)雜的化學(xué)反應(yīng)和物理變化的綜合結(jié)果。在ELF的反應(yīng)過程中很容易形成假的熒光結(jié)晶，使FISH信號減弱，引起非特異性結(jié)晶沉積在組織細(xì)胞表面，造成背景信號，試驗(yàn)結(jié)果證實(shí)，只要延長ELF的反應(yīng)時間，就可以避免背景染色。
·熒光酶聯(lián)免疫技術(shù)避免背景染色的方法有3種。
1.商品化試劑盒內(nèi)提供一種延時試劑。
2.在顯色液中加入4%PVP。
3.顯色時間控制在15~30min內(nèi)。
進(jìn)口ELISA試劑盒化學(xué)方法主要根據(jù)待測物與其他物質(zhì)的化學(xué)反應(yīng)、產(chǎn)生顏色變化來進(jìn)行。該方法是zui早用于定量測定生物體內(nèi)微量有機(jī)物質(zhì)的基本方法。但因其檢出的靈敏度低(要求采樣很多)、特異性差，而且操作麻煩，因此也不利于推廣應(yīng)用。
·如何分辨所購高靈敏ELISA試劑盒是否能測血清血漿樣本呢?
1.如沒有提供專門用于血清血漿樣本的緩沖液，那么只要用已知濃度的待測指標(biāo)蛋白加入所測種屬的血清作為樣本加樣和用已知濃度的待測指標(biāo)蛋白加入PBS緩沖液中同時檢測對比，即可知道該試劑盒是否可以直接用來測血清血漿樣本。
2.如提供專門用于血清血漿樣本的緩沖液，可用已知濃度的待測指標(biāo)蛋白加入所測種屬的血清直接加樣和用緩沖液按說明書分別加樣，也可得出結(jié)果。
如該種類型試劑盒樣本總量如為100μl的話，一般而言，會是50μl的樣本加樣量和50μl的特定的緩沖液。
在使用進(jìn)口ELISA試劑盒的過程，可將已知濃度的蛋白用血清或血漿調(diào)配到試劑盒標(biāo)定的檢測限的zui高值的2倍，加入50μl做兩孔，一孔補(bǔ)入常規(guī)的50μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液，一孔補(bǔ)入50μl樣本分析緩沖液，即可區(qū)分出效果來，有時候，有些為了達(dá)到“消除”的效果，在樣本分析緩沖液中加入待測目標(biāo)蛋白，為了鑒別出這種情況，也可直接加入樣本分析緩沖液做一孔，同時做對比，這樣可試出高靈敏ELISA試劑盒中的針對血清血漿樣本的緩沖液是否真的有效。
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