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技術(shù)文章

ELISA試劑盒基本操作與判定

閱讀:153發(fā)布時間:2016-8-31

ELSIA 操作步驟復(fù)雜,影響反應(yīng)因素較多,特別是固相載體的包被難達到各個體之間的一致,因此在定量測定中,每批測試均須用一系列不同濃度的參考標(biāo)準(zhǔn)品在相同的條件下制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。測定大分子量物質(zhì)的夾心法ELISA試劑盒 ,標(biāo)準(zhǔn)曲線的范圍一般較寬,曲線zui高點的吸光度可接近2.0 ,繪制時常用半對數(shù)紙,以檢測物的濃度為橫坐標(biāo),以吸光度為縱坐標(biāo),將各濃度的值逐點連接,所得曲線一般呈S 形,其頭、尾部曲線趨于平坦,*較呈直線的部分是的檢測區(qū)域。
這類反應(yīng)的定性結(jié)果可以用肉眼判斷。目視標(biāo)本也無色或近于無色者判為陰性,顯色清晰者為陽性。但在ELISA試劑盒中,正常人血清反應(yīng)后??沙霈F(xiàn)呈色的本底,此本底的深淺因試劑的組成和實驗的條件不同而異,因此實驗中必須加測陰性對照。陰性對照的組成應(yīng)為不含受檢物的正常血清或類似物。在用肉眼判斷結(jié)果時,更宜用顯色深于陰性對照作為標(biāo)本陽性的指標(biāo)。
陽性判定值
陽性判定值(cut-off value )一般為陰性對照A 值加上一個特定的常數(shù),以此作為判斷結(jié)果陽性或陰性的標(biāo)準(zhǔn)。用此法判斷結(jié)果要求實驗條件十分恒定,試劑的制備必須標(biāo)準(zhǔn)化,陽性和陰性的對照品應(yīng)符合一定的規(guī)格,須配用精密的儀器,并嚴格按規(guī)定操作。陽性判定值公式中的常數(shù)是在這特定的系統(tǒng)中通過對大量標(biāo)本的實驗檢測而得到的。現(xiàn)舉某種檢測 HBsAg 的試劑盒為例。試劑盒中的陰性對照品為不含HBsAg 的復(fù)鈣人血漿,陽性對照品HBsAg 的含量標(biāo)明為P=9±2ng /ml。每次試驗設(shè)2 個陽性對照和3 個陰性對照。
測得A 值后,先計算陰性對照A 值的平均數(shù)(NC X )和陽性對照A 值的平均數(shù)(PCX),兩個平均數(shù)的差(P-N)必須大于一個特定的數(shù)值(例0.400),試驗才有效。3 個陰性對照A 值均應(yīng)≥0.5×NCX,并≤1.5 ×NCX,如其中之一超出此范圍,則棄去,而已另兩個陰性對照重新計算NCX;如有兩個陰性對照A 值超出以上范圍,則該次實驗無效。
C1orf52    1號染色體開放閱讀框52抗體
C1orf67    1號染色體開放閱讀框67抗體
C1orf83    1號染色體開放閱讀框83抗體
CRISP3    富含半*分泌蛋白3抗體
CDKN2C    細胞周期蛋白依賴性激酶抑制劑2C抗體
Cullin 2    Cullin2抗體
CAMK1D    鈣調(diào)蛋白激酶CaMK1D抗體
CHX10    CHX10蛋白抗體
CRIPTO    畸胎瘤衍化生長因子單克隆抗體(C端)
CDKN2B    細胞周期蛋白依賴性激酶抑制劑2B抗體
CRIPTO    畸胎瘤衍化生長因子單克隆抗體
CHFR    泛素連接酶蛋白CHFR抗體
Cullin 1    Cullin1抗體
Cofilin    肌動蛋白結(jié)合蛋白CFL抗體
CDMP1    軟骨衍生形態(tài)發(fā)生蛋白1抗體
Beta-casein    β-酪蛋白抗體
ELISA試劑盒

 

 

 


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