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技術(shù)文章

免疫細(xì)胞的分離和保存技術(shù)

閱讀:497發(fā)布時(shí)間:2016-4-15

一、分離細(xì)胞的保存ELISA試劑盒
在某些情況下,分離所得細(xì)胞需要加以保存,否則活力迅速下降,甚至死亡。
(一)短期保存技術(shù)
       將分離到的細(xì)胞用適量含10%~20%滅活小牛血清的Hanks、Tc-199、RPMI1640或其他培養(yǎng)液稀釋重懸。所用培養(yǎng)液要求等滲,具緩沖作用,并對細(xì)胞無毒性。通常置4℃保存較好,可減低細(xì)胞代謝活動(dòng)。要注意不要迅速改變細(xì)胞所處的溫度,以免造成細(xì)胞“溫度”休克。
(二)長期冷凍保存技術(shù)
       利用液氮深低溫(-196℃)環(huán)境保存細(xì)胞,是當(dāng)前世界上通用的細(xì)胞長期保存技術(shù)。其原理在于深低溫環(huán)境可中斷細(xì)胞的代謝,但在降溫過程由于冰晶的形成和滲透壓的改變均可導(dǎo)致細(xì)胞的損傷和部分死亡,所以在冷凍過程中一定要加用冷凍保護(hù)劑,常用的保護(hù)劑為二甲亞砜(dimethylsulfoxide,DMSO)。冷凍時(shí)的降溫速度和細(xì)胞解凍時(shí)的升溫速度對細(xì)胞活力的保存有很大影響。條件合適時(shí),凍存細(xì)胞一旦復(fù)蘇,恢復(fù)37℃培養(yǎng),其形態(tài)和代謝活動(dòng)均可恢復(fù)正常。操作的原則是先對需凍存的細(xì)胞作活細(xì)胞計(jì)數(shù),低速離心后,取沉積細(xì)胞用含10%二甲亞砜的小牛血清配制成適當(dāng)濃度的細(xì)胞懸液,分裝于凍存管內(nèi),速即放入降溫過渡站中,避免二甲亞砜對細(xì)胞的損傷。繼而進(jìn)行降溫冷凍
       目前常用兩步降溫法,即迅速降溫至一選擇好的臨界溫作為過渡站,如-80℃低溫冰箱,或在液氮罐液面以上的一層空間放置片刻,然后再放入液氮中。如需復(fù)蘇細(xì)胞,則需迅速解凍以恢復(fù)細(xì)胞的活力,要求在20s以內(nèi)*融化。將凍存管自液氮中取出,立即放入40℃溫水中,融化后即從水中取出,吸出細(xì)胞懸液,加入10倍的培養(yǎng)液中混勻,繼而低速離心,盡快洗去保護(hù)劑,再懸于新培養(yǎng)液中,計(jì)數(shù)并檢查細(xì)胞活力,然后置37℃培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)。
二、細(xì)胞活力測定
       細(xì)胞活力常用百分比表示,活力的大小對試驗(yàn)結(jié)果有很大影響。細(xì)胞活力的測定有許多方法,zui簡便常用的方法是臺盼藍(lán)(trypanblue)染色法。臺盼藍(lán)又稱錐藍(lán),是一種陰離子型染料,這種染料不能透過活細(xì)胞正常完整的細(xì)胞膜,故活細(xì)胞不著色,但死亡細(xì)胞的細(xì)胞膜通透性增加,可使染料通過細(xì)胞膜進(jìn)入細(xì)胞內(nèi),使死細(xì)胞著色呈藍(lán)色。

Phospho-Aurora B (Thr232) + Aurora C (Thr198)    磷酸化有絲分裂激酶B/C抗體
phospho-Acinus (Ser1180)    磷酸化腺泡Acinus蛋白抗體
phospho-ADRB2 (Ser346)    磷酸化腎上腺素能受體β2抗體
APS    APS抗體
ACVRL1    激活素受體樣激酶1抗體
ACVR1B    激活素A受體1B抗體
phospho-Androgen Receptor (Ser597)    磷酸化雄激素受體抗體
phospho-A Raf (Ser214)    磷酸化A-Raf抗體
ASAH2    ?;拾贝济擋C?抗體
ASAM    脂肪細(xì)胞特異性粘附分子抗體
AAV5 capsid VP2 protein    腺相關(guān)病毒5抗體
AMPK gamma 3    腺苷酸活化蛋白激酶γ3抗體
AMPK beta 2    腺苷單磷酸活化蛋白激酶β2抗體
phospho-APC1 (Ser355)    磷酸化細(xì)胞周期末期促進(jìn)復(fù)合蛋白APC1抗體
ANAPC1    細(xì)胞周期末期促進(jìn)復(fù)合蛋白APC1抗體
phospho-AKT2 (Ser474)    磷酸化蛋白激酶B2抗體

ELISA試劑盒


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