考察感毒清顆粒體內(nèi)、外抗流感病毒作用,并考察其對干擾素的誘生作用及Toll樣受體信號通路的影響。 方法：1.建立流感病毒A/四川/SWL/2009(H1N1)感染小鼠病毒性肺炎模型,考察感毒清顆粒對動物的死亡保護(hù)作用,并檢測第3天和第6天的肺指數(shù)、肺病理形態(tài)學(xué)及肺組織病毒滴度的影響,評價感毒清顆粒體內(nèi)的抗流感病毒效應(yīng)。2.建立流感病毒(流感病毒A/四川/SWL/2009(H1N1),流感病毒A/福建同安/196/2009(H3N2),流感病毒B/重慶渝中/1384/2009,流感病毒B/四川安岳/139/2011)感染MDCK細(xì)胞模型,采用細(xì)胞病變法(CPE)測定TCID50,考察感毒清顆粒的體外抗病毒作用。3.建立流感病毒性肺炎模型,分別于第3天和第6天無菌取肺組織,采用ELISA法檢測肺組織勻漿中IFN-α、IFN-β、IFN-γ的含量。采用Western Blot法測定Toll樣受體信號通路關(guān)鍵靶點TLR3、TLR7、 TLR8、TLR9、ELISA試劑盒 TRAF6、IRF3、IRF7、IRF8、c-Jun, NF-κB蛋白表達(dá)。 結(jié)果：1.感毒清顆?？商岣吡鞲蟹窝啄Ｐ托∈蟮拇婊盥?延長存活時間,減輕或逆轉(zhuǎn)由于病毒感染引起的體重下降,降低動物發(fā)病率和發(fā)病嚴(yán)重程度。同時可降低模型動物感染后第3和6天的肺指數(shù)、肺組織炎癥和肺組織纖維化程度,延緩病程發(fā)展,并降低感染動物的肺病毒載量和病毒復(fù)制速率,且具有劑量相關(guān)性2.CPE測定流感病毒A/四川/SWL/2009(H1N1),流感病毒A/福建同安/196/2009(H3N2),流感病毒B/重慶渝中/1384/2009,流感病毒B/四川安岳/139/2011對MDCK的TCID50的log值分別為7.07,8.07,5.91,6.41,感毒清顆粒水溶液對MDCK細(xì)胞的TC0為530μg/ml。zui高無毒濃度的感毒清顆粒水溶液對流感病毒A/四ELISA試劑盒川/SWL/2009(H1N1)、流感病毒A/福建同安/196/2009(H3N2),流感病毒B/重慶渝中/1384/2009都無抑制活性,口服感毒清顆粒小鼠血清與對照小鼠血清無差異。3.病毒感染第3天和第6天,Toll樣受體信號通路中TLR3、TLR7、TLR8受體含量顯著高于空白組,有顯著統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),而TLR9、IRF8與空白組無差異,無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。TRAF6、IRF3、IRF7、c-Jun和NF-κBp65受體蛋白表達(dá)量均顯著高于空白組(P0.05),說明病毒激活了Toll樣受體信號通路。各給藥組樣本與安慰劑組相比,第3天樣本的IFN-β含量都顯著高于安慰劑組,感毒清顆粒中劑量組IFN-α含量高于安慰劑組,IFN-γ無統(tǒng)計意義。感毒清顆粒組第3天和第6天TLR3、TLR7、TLR8、TRAF6、IRF3、c-Jun和NF-κB p65受體蛋白表達(dá)量均顯著低于模型對照組,有顯著統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),并呈—定的劑量依賴關(guān)系。 結(jié)論：感毒清顆粒體內(nèi)具有明顯抗病毒效果；體外無明顯抗病毒作用；抗病毒作用與早期誘生內(nèi)源性IFN-α,誘生IFN-β有關(guān)及拮抗/抑制病毒激活的Toll樣受體信號通路相關(guān)蛋白有關(guān)ELISA試劑盒。
