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elisa檢測中操作技術的影響

閱讀：145發(fā)布時間：2015-3-3

⑴ ELISA嚴格按照試劑說明書進行操作。操作前將試劑在室溫下平衡30～60min。


⑵ 加樣后及時放人孵箱。標本較多時，要分批操作。按說明步驟嚴格控制操作時間，防止孵育時間人為延長，導致非特異性結合緊附于反應孔周圍，難以清洗*。


（3）封板溫育時，各孔一定要封嚴，防止陽性標本的液體蒸發(fā)，產(chǎn)生周邊現(xiàn)象從而導致“花板"的出現(xiàn)。


（4）用洗板機洗板時，保證洗液注滿各孔，洗板針暢通，洗完板后在吸水紙（選擇干凈、無或少塵的吸水材料）上輕輕拍干：還要防止針口有纖維蛋白或異物，這些異物在洗板的過程中易產(chǎn)生拖帶現(xiàn)象而導致“花板"的出現(xiàn)。


（5）合理安排檢測量，以免反應板過多造成洗板等待時間長。


（6）加酶試劑后用吸水紙在酶標板表面輕拭吸干。


（7）顯色劑盡量在臨用前配制，堅持不用過期顯色劑，肉眼可見淺藍色的TMB顯色劑不用。


（8）加樣時保持顯色劑不外流；A、B液應避免接觸金屬器械。加終止液時應避免產(chǎn)生氣泡。


（9）應保證酶標板清潔，整個操作過程中保證酶標板不接觸次氯酸。以上的措施可以使“花板"降至zui低限度。從而提高檢測的特異性。并得到更準確、可靠的實驗結果。

    

    加樣吸嘴的潔凈與否和吸量的準確性，直接影響檢測結果。由于吸嘴構造特殊，導致清洗困難，加大了交叉污染的機會。建議用一次性吸嘴。加樣器也要經(jīng)常清洗，定期校準。加樣時應將所加物加在 ELISA 板孔的底部，避免加在孔壁上部，并注意不可濺出。


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