大鼠(BUN)Elisa試劑盒實驗前有五項準備你知道嗎?
1．大鼠尿素氮(BUN)Elisa試劑盒使用前應將盒內各試劑取出，室溫放置至少30分鐘。
2．準備各種實驗儀器及材料，如微量移液器，吸頭，醫(yī)用蒸餾水等
3．濃縮洗液與醫(yī)用蒸餾水1︰19倍稀釋后成為應用洗滌液
4．濃縮樣品稀釋液與醫(yī)用蒸餾水1︰4倍稀釋成應用樣品稀釋液
5．用大鼠尿素氮(BUN)Elisa試劑盒應用樣品稀釋液來稀釋樣品，按照1：100的體積比來稀釋樣品如10μl的樣品加入到1ml的應用樣品稀釋液中，充分混勻待用。）
操作步驟
標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。
3200pmol/L
5號標準品
150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液
1600pmol/L
4號標準品
150μl的5號標準品加入150μl標準品稀釋液
800pmol/L
3號標準品
150μl的4號標準品加入150μl標準品稀釋液
400pmol/L
2號標準品
150μl的3號標準品加入150μl標準品稀釋液
200pmol/L
1號標準品
150μl的2號標準品加入150μl標準品稀釋液
Elisa試劑盒加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品zui終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。
加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。
溫育：操作同3。
洗滌：操作同5。
顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.
終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。
測定：以空白空調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行 96T
100pmol/L – 3200pmol/L
使用目的：
本試劑盒用于測定大鼠血清、血漿及相關液體樣本中尿素氮(BUN)含量。
大鼠尿素氮(BUN)Elisa試劑盒實驗原理
本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中大鼠尿素氮(BUN)水平。用純化的大鼠尿素氮(BUN)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入尿素氮(BUN)，再與HRP標記的尿素氮(BUN)抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的尿素氮(BUN)呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標準曲線計算樣品中大鼠尿素氮(BUN)濃度。
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