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ELISA試劑盒抗原修復(fù)應(yīng)注意的問(wèn)題

閱讀：208發(fā)布時(shí)間：2017-8-1

ELISA試劑盒操作中還應(yīng)留意如下疑問(wèn)：
1、熱處理后應(yīng)留意天然冷卻。
2、熱處理時(shí)要防止切片枯燥。
3、應(yīng)根據(jù)不一樣的抗體挑選適宜的抗原修正辦法。
4、同一批抗原的檢測(cè)所用溫度和時(shí)刻確保一致。
5、留意形態(tài)學(xué)構(gòu)造的改動(dòng)（通常經(jīng)高溫修正后胞漿會(huì)顯著被損壞，對(duì)細(xì)胞核的影響較大，會(huì)呈現(xiàn)核決裂與蘇木到淡染等景象；而經(jīng)酶水解的切片，其細(xì)胞漿損壞視消化時(shí)刻長(zhǎng)短而異，但核損壞較輕）。6、如果在常用的緩沖液中無(wú)法完成抗原修正，或經(jīng)修正后的抗原定位發(fā)生改動(dòng)，可改用一些不常用的緩沖液，或加一些螯合劑，如EDTA等可改善某些抗原的修正。

用于ELISA試劑盒免疫酶安排化學(xué)抗原修正的消化酶許多，所選酶的品種、運(yùn)用的濃度、pH、消化時(shí)刻及溫度等均要視安排固定的不一樣，所檢測(cè)抗原的性質(zhì)與安排類型的不一樣而異，應(yīng)經(jīng)過(guò)預(yù)試驗(yàn)探索斷定。運(yùn)用酶消化的原則：*和蛋白酶K通常用于細(xì)胞內(nèi)抗原，如Keratin,CEA與GFAP等。*則首要用于細(xì)胞間質(zhì)抗原的檢測(cè)。如fibronectin,Laminin與各型膠原等。通常來(lái)說(shuō)，消化時(shí)刻和安排切片固定的長(zhǎng)短呈正比。在用酶消化與熱修正后均不能獲得成果的前提下運(yùn)用抗原修正與酶消化的辦法，有時(shí)會(huì)取得較為滿足的成果。通常常用蛋白酶K和微波相，但應(yīng)留意，無(wú)論何種性質(zhì)的抗原檢測(cè)均可能會(huì)在核內(nèi)呈現(xiàn)假陽(yáng)性反應(yīng)。因此有必要要做對(duì)照。

 


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