（一）包被用抗原：
ELISA試劑盒(酶聯(lián)免疫剖析試劑盒)用于包被固相載體的抗原按其來歷不一樣可分為天然抗原、重組抗原和組成多肽抗原三大類。天然抗原可取自動物安排、微生物培育物等，須經(jīng)獲取純化才干作包被用。如HBsAg能夠從攜帶者的血清中獲取，通常的細(xì)菌和病毒抗原能夠從其培育物中獲取，蛋白成份抗原可從富含此抗原的資料中獲取等（例如AFP從臍帶血或胎肝中獲?。?。重組抗原是抗原基因在質(zhì)粒體中表達(dá)的蛋白質(zhì)抗原，多以大腸桿菌或酵母菌為質(zhì)粒體。重組抗原的優(yōu)點(diǎn)是除工程菌成份外，別的雜質(zhì)少，并且無傳染性，但純化技能難度較大。以大腸桿菌為質(zhì)粒體的重組抗原如不能充沛除大腸桿菌成份，用于ELISA，在反響中可呈現(xiàn)假陽性，因不少受檢者受大腸桿菌傳染而在血清中存在抗大腸桿菌抗體。重組抗原的另一特點(diǎn)是能用基因工程制備某些無法從天然資料中別離的抗原物質(zhì)。例如丙型肝炎病毒（HCV）尚不能培育成功，并且丙肝病人血清中HCV抗原含量極微?，F(xiàn)在檢查抗HCV ELISA中所用包被抗原大多為依據(jù)HCV的基因克隆表達(dá)而制備的重組抗原。在流行癥診斷中，不少重組抗原如HBsAg、HBeAg和HIV抗原等均在ELISA中獲得使用。組成多肽抗原是依據(jù)蛋白質(zhì)抗原分子的某一抗原決定簇的氨基酸序列人工組成的多肽片段。多肽抗原通常只富含一個抗原決定簇，純度高，特異性也高，但由于分子量太小，通常難于直接吸附于固相上。多肽抗原的包被通常需先使其與無關(guān)蛋白質(zhì)如牛血清白蛋白質(zhì)（BSA）等偶聯(lián)，借助于偶聯(lián)物與固相載體的吸附，間接地結(jié)合到固相載體外表。使用多肽抗原的另一留意點(diǎn)為他僅能檢查與其相應(yīng)的抗體。一種蛋白質(zhì)抗原通常富含多個不一樣的能導(dǎo)致抗體發(fā)作的決定簇，因而在受
檢血清中的別的抗體就不能與該多肽抗原發(fā)作反響。別的，某些微生物發(fā)作變異時通常發(fā)
生抗原構(gòu)造改變，在這種情況下，用單個多肽抗原進(jìn)行包被可導(dǎo)致別的抗體的漏檢。
（二）包被用抗體：
ELISA試劑盒(酶聯(lián)免疫剖析試劑盒)包被固相載體的抗體應(yīng)具有高親和力和高特異性，可取材于抗血清或含單克隆抗體的腹水或培育液。如免疫用抗原中富含雜質(zhì)（即便是極微量的），在抗血清中將呈現(xiàn)雜抗體，有必要除掉（可用吸收法）后才干用于ELISA，以確保實(shí)驗(yàn)的特異性?？寡宀荒苤苯佑糜诎唬瑧?yīng)先獲取IgG，通常采用硫酸銨鹽析和Sephadex凝膠過濾法。通常經(jīng)硫酸銨鹽析粗提的IgG已可用于包被，高度純化的IgG性質(zhì)不穩(wěn)定。如需用高親和力的抗體包被以進(jìn)步實(shí)驗(yàn)的敏感性，則可采用親和層析法以除掉抗血清中含量較多的非特異性IgG。腹水中單抗的濃度較高，特異性亦較強(qiáng)，因而不需要作吸收和親和層析處理，通?？蓪⒏顾髑‘?dāng)稀釋后直接包被，必要時也可用純化的IgG。使用單抗包被時應(yīng)留意，一種單抗僅對于一種抗原決定簇，在某些情況下，用多種單抗混合包被，可獲得非常好的作用。
會員1.png)