ELISA試劑盒試驗(yàn)初步前，各試劑均應(yīng)平衡至室溫，試劑不能直接在37 溶解;試劑或樣品制造時(shí)，均需充沛混勻，混勻時(shí)盡量防止起泡。試驗(yàn)前應(yīng)猜想樣品含量，如樣品濃度過(guò)高時(shí)，應(yīng)對(duì)樣品進(jìn)行稀釋，以使稀釋后的樣品符合試劑盒的檢查計(jì)劃，計(jì)算時(shí)再乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。
ELISA試劑盒加樣：分別設(shè)空白孔、規(guī)范孔、待測(cè)樣品孔?？瞻卓准訕悠废♂屢?100 ，余孔分別加規(guī)范品或待測(cè)樣品100 ，留心不要有氣泡，加樣 時(shí)將樣品加于酶標(biāo)板底部，盡量不觸及孔壁，悄然晃動(dòng)混勻，酶標(biāo)板加上蓋或覆膜，37 溫育2小時(shí)。為保證試驗(yàn)作用有效性，每次試驗(yàn)請(qǐng)運(yùn)用新的規(guī)范品溶液。
每孔加檢查溶液B工作液（臨用前制造）100 ，加上覆膜，37 溫育1小時(shí)。
棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板5次，方法同進(jìn)程3。
每孔加底物溶液90 ，酶標(biāo)板加上覆膜37 避光顯色（反響時(shí)間操控在15-30分鐘，當(dāng)規(guī)范孔的前3-4孔有顯著的梯度藍(lán)色，后3-4孔梯度不顯著時(shí)，即可間斷）。
每孔加間斷溶液50 ，間斷反響，此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色。間斷液的參加次序應(yīng)盡量與底物液的參加次序一樣。
ELISA試劑盒反響時(shí)間的操控：參加底物后請(qǐng)守時(shí)查詢反響孔的色彩改動(dòng)（比方，每隔10分鐘），如色彩較深，請(qǐng)?zhí)嵩鐓⒓娱g斷液間斷反響，防止反響過(guò)強(qiáng)然后影響酶標(biāo)儀光密度讀數(shù)。
棄去液體，甩干，不用洗刷。每孔加檢查溶液A工作液100 （臨用前制造），酶標(biāo)板加上覆膜，37 溫育1小時(shí)。
棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板 3次，每次浸泡1-2分鐘，大概400 /每孔，甩干（也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干）。
ELISA試劑盒當(dāng)即用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)丈量各孔的光密度（值）。
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