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公司動(dòng)態(tài)

ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)效果判定

閱讀:114發(fā)布時(shí)間:2016-11-3

ELISA試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA).已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)品、不知道濃度的樣品參與微孔酶標(biāo)板內(nèi)進(jìn)行查看。先將*符號的抗體一同溫育。洗刷后,參與親和素符號過的HRP。再經(jīng)過溫育和洗刷,去掉未聯(lián)絡(luò)的酶聯(lián)絡(luò)物,然后參與底物A、B,和酶聯(lián)絡(luò)物一同效果。發(fā)作顏色。顏色的深淺和樣品中的濃度呈比例關(guān)系。
包被:用0.05MPH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質(zhì)含量為1~10μg/ml。在每個(gè)聚苯乙烯板的反應(yīng)孔中加0.1ml,4℃ 過夜。次日,棄去孔內(nèi)溶液,用洗刷緩沖液洗3次,每次3分鐘。(簡稱洗刷,下同)。
加樣:加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,置37℃ 孵育1小時(shí)。然后洗刷。(一同做空白孔,陰性對照孔及陽性對照孔)。
加酶標(biāo)抗體:于各反應(yīng)孔中,參與新鮮稀釋的酶標(biāo)抗體(經(jīng)滴定后的稀釋度)0.1ml。37℃ 孵育0.5~1小時(shí),洗刷。
ELISA試劑盒測定技術(shù)的展開首要在于方法學(xué)的展開,而方法學(xué)的展開依托于試劑出產(chǎn)技術(shù)不斷進(jìn)步更新和型符號物的運(yùn)用。分子生物學(xué)正在并畢竟肯定會讓對悉數(shù)生命科學(xué)有一個(gè)悉數(shù)而*的知道,其對免疫測定技術(shù)展開的影響也是直接而又有用的,對從前一些難以查看的生物活性物質(zhì)的測定,并且大大提高了查看的靈敏度和特異性。
加底物液顯色:于各反應(yīng)孔中參與暫時(shí)制作的TMB底物溶液0.1ml,37℃ 10~30分鐘。
終止反應(yīng):于各反應(yīng)孔中參與2M硫酸0.05ml。
可于白色布景上,直接用肉眼查詢效果:反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深,陽性程度越強(qiáng),陰性反應(yīng)為無色或極淺,依據(jù)所呈顏色的深淺,以“+”、“-”號標(biāo)明。也可測OD值:在ELISA查看儀上,于450nm(若以ABTS顯色,則410nm)處。
ELISA試劑盒以空白對照孔調(diào)零后測各孔OD值,若大于規(guī)矩的陰性對照OD值的2.1倍,即為陽性。


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