ELISA試劑盒屬固相免疫測定，抗原、抗體的聯(lián)絡(luò)只在固相表面上發(fā)生。以抗體包被的夾心法為例，參與板孔中的標本，其中的抗原并不是都有平等的和固相抗聯(lián)絡(luò)的機遇，只需zui靠近孔壁的一層溶液中的抗原直接與抗體觸摸。這是一個逐步平衡的進程，因此需經(jīng)渙散才華抵達反應(yīng)的結(jié)束。在這以后參與的酶符號抗體與固相抗原的聯(lián)絡(luò)也一樣如此。這便是為何ELISA反應(yīng)老是需要必定時間的溫育。
溫育常選用的溫度有43℃、37℃、室溫文4℃（冰箱溫度）等。37℃是試驗室中常用的保溫溫度，也是大多數(shù)抗原抗體聯(lián)絡(luò)的適合溫度。在建立ELISA方法作反應(yīng)動力學(xué)研討時，試驗標明，兩次抗原抗體反應(yīng)一般在37℃經(jīng)1-2小時，產(chǎn)品的生成可達。為加速反應(yīng)，可前進反應(yīng)的溫度，有些試驗在43℃進行，但不宜選用更高的溫度?？乖贵w反應(yīng)4℃更為*，在放射免疫測定中多使反應(yīng)在冰箱中過夜，以構(gòu)成zui多的堆積。但因所需時間太長，在ELISA中一般不予選用。
ELISA試劑盒中一般有兩次抗原抗體反應(yīng)，即加標本和加酶聯(lián)絡(luò)物后。抗原抗體反應(yīng)的結(jié)束需要有必定的溫度和時間，這一保溫進程稱為溫育(incubation)，有人稱之為孵育，在ELISA中似不恰當(dāng)。
保溫的方法除有的ELISA儀器附有特制的電熱塊外，一般均選用水浴，可將ELISA板置于水浴箱中，為保證這一點，一個人操作時，一次不宜多于兩塊板一同測定。
ELISA板底應(yīng)貼著水面，使溫度靈敏平衡。為避免蒸發(fā)，板上應(yīng)加蓋，也可用塑料貼封紙或保鮮膜覆蓋板孔，此刻可讓反應(yīng)板漂浮在水面上。若用保溫箱，ELISA板應(yīng)放在濕盒內(nèi)，濕盒要選用傳熱性杰出的材料如金屬等，在盒底墊濕的紗布，zui終將ELISA板放在濕紗布上。濕盒應(yīng)先放在保溫箱中預(yù)溫至規(guī)矩的溫度，特別是在氣溫較低的時分更應(yīng)如此。無論是水浴仍是濕盒溫育，反應(yīng)板均不宜疊放，以保證各板的溫度都能靈敏平衡。室溫溫育的反應(yīng)，操作時的室溫應(yīng)嚴峻束縛在規(guī)矩的范圍內(nèi)，規(guī)范室溫溫度是指20-25℃，但具體操作時可根據(jù)說明書的請求操控溫育。
ELISA試劑盒室溫溫育時，ELISA板只需平置于操作臺上即可。應(yīng)留心溫育的溫度和時間應(yīng)按規(guī)矩力求準確。
