根據(jù)試劑的來源和樣本的情況以及檢測(cè)的具體條件，可設(shè)計(jì)出各種不同類型的檢測(cè)方法。以下主要介紹幾種公司常用的檢測(cè)抗原的類型：人ELISA試劑盒的樣本中的待測(cè)藥物和固相化的抗原共同競(jìng)爭(zhēng)一定量的抗體，加入酶標(biāo)記抗抗體（酶標(biāo)二抗）后能與固相化的抗原抗體復(fù)合物特異性結(jié)合，經(jīng)底物顯色后檢測(cè)，樣本中藥物含量愈高，競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合的抗體量愈多，從而結(jié)合在固相上的酶標(biāo)記抗抗體（酶標(biāo)二抗）量愈少，zui后的顯色也愈淺。本公司及國內(nèi)產(chǎn)品多用此法。
具體操作步驟如下：
1）抗原固相化：將特異性抗原與固相載體聯(lián)結(jié)，人ELISA試劑盒形成固相抗原，洗滌除去未結(jié)合的抗原及雜質(zhì)。
2）加入標(biāo)準(zhǔn)品/樣本，再加入抗體，保溫反應(yīng)。樣本中藥物與固相抗原同時(shí)競(jìng)爭(zhēng)與特異性抗體結(jié)合，形成固相抗原抗體復(fù)合物。洗滌除去游離物質(zhì)及吸附在固相載體上結(jié)合不緊密的物質(zhì)。
3）加酶標(biāo)抗抗體，人ELISA試劑盒固相免疫復(fù)合物中的抗體與酶標(biāo)抗體抗體結(jié)合，從而間接地標(biāo)記上酶。洗滌后，固相載體上的酶量與樣本中受檢藥物的量負(fù)相關(guān)。
4）加底物顯色，固相上的酶催化底物成為有色產(chǎn)物。通過儀器檢測(cè)分析，測(cè)知樣本中抗原的量。結(jié)合在固相載體表面的抗原或抗體仍，酶標(biāo)記的抗原或抗體既保留其免疫學(xué)活性，人ELISA試劑盒又保留酶的活性。在測(cè)定時(shí)，受檢標(biāo)本（測(cè)定其中的抗體或抗原）與固相載體表面的抗原或抗體起反應(yīng)。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復(fù)合物與液體中的其他物質(zhì)分開。再加入酶標(biāo)記的抗原或抗體，也通過反應(yīng)而結(jié)合在固相載體上。
此時(shí)固相上的酶量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量呈一定的比例。加入酶反應(yīng)的底物后，底物被酶催化成為有色產(chǎn)物，人ELISA試劑盒產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān)，故可根據(jù)呈色的深淺進(jìn)行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高，間接地放大了免疫反應(yīng)的結(jié)果，使測(cè)定方法達(dá)到很高的敏感度。
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