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兔ELISA試劑盒標(biāo)本的處理方法

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可用作兔ELISA試劑盒測(cè)定的標(biāo)本十分廣泛,體液(如血清)、分泌物(唾液)和排泄物(如尿液)、
細(xì)胞培養(yǎng)上清、細(xì)胞、組織等均可作標(biāo)本以測(cè)定其中某種成份。有些標(biāo)本可直接進(jìn)行測(cè)定,有些
則需經(jīng)預(yù)處理。 
◆ 血清: 
室溫血液自然凝固 10-20 分鐘后,離心 20 分鐘左右( 2000-3000 轉(zhuǎn) / 分)。收集上清。如
有沉淀形成,應(yīng)再次離心。 
◆ 血漿: 
應(yīng)根據(jù)試劑盒的要求選擇 EDTA 、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,加入 10 %( v/v )抗凝劑 
( 0.1M 檸檬酸鈉或 1% heparin 或 2.0%EDTA.Na2) 混合 10-20 分鐘后,離心 20 分鐘左右
( 2000-3000 轉(zhuǎn) / 分)。仔細(xì)收集上清。如有沉淀形 成,應(yīng)再次離心。 
◆ 尿液、胸腹水、腦脊液: 
用無(wú)菌管收集。離心 20 分鐘左右( 2000-3000 轉(zhuǎn) / 分)。仔細(xì)收集上清。如有沉淀形成,
應(yīng)再次離心。 
兔ELISA試劑盒細(xì)胞培養(yǎng)上清: 
檢測(cè)分泌性的成份時(shí),用無(wú)菌管收集。離心 20 分鐘左右( 2000-3000 轉(zhuǎn) / 分)。仔細(xì)收集
上清。檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的 成份時(shí),用 PBS ( PH7.2-7.4 )稀釋細(xì)胞懸液,細(xì)胞濃度達(dá)到 100 萬(wàn) 
/ml 左右。通過(guò)反復(fù)凍融,以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心 20 分鐘左右( 2000-3000 轉(zhuǎn) 
/ 分)。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。 
◆ 細(xì)胞: 
檢測(cè)細(xì)胞的成份時(shí),對(duì)于貼壁細(xì)胞,去除培養(yǎng)液,用PBS、生理鹽水或無(wú)血清培養(yǎng)液洗一遍。加
入適量裂解液。用槍吹打數(shù)下,使裂解液和細(xì)胞充分接觸。通常裂解液接觸細(xì)胞10 秒后,細(xì)胞
就會(huì)被裂解。對(duì)于懸浮細(xì)胞,離心收集細(xì)胞,用PBS、生理鹽水或無(wú)血清培養(yǎng)液洗一遍.加入適
量裂解液, 用槍吹打把細(xì)胞吹散。用手指輕彈以充分裂解細(xì)胞。充分裂解后應(yīng)沒(méi)有明顯的細(xì)胞沉
淀。如果細(xì)胞量較多,必需分裝然后再裂解。充分裂解后,10000-14000g離心3-5 分鐘,取上
清,即可進(jìn)行后續(xù)操作。 
 
◆ 組織標(biāo)本: 
切割標(biāo)本后,稱(chēng)取重量。加入一定量的 PBS 或組織蛋白萃取試劑,緩沖液中可加入蛋白酶抑制
劑。用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。離心 20 分鐘左右( 2000-3000 轉(zhuǎn) / 分)。兔ELISA試劑盒仔細(xì)收集
上清置于 -20 度或 - 70 度保存,如有必要,可以將樣品濃縮干燥。分裝后一份待檢測(cè),其余
冷凍備用。


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