試驗原理：ELISA試劑盒的基礎是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶符號。結合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學活性，酶符號的抗原或抗體既保存其免疫學活性，又保存酶的活性。
試驗材料：抗原 ，血清，96孔酶標板 4℃冰箱 ，恒溫培育箱 ，分光光度計。
試驗步驟：
一、包被抗原
1. 用50mM 的碳酸鹽包被緩沖液（pH 9.6）溶解抗原，使抗原濃度為10-20 μg/ml，加100 μl/孔到96 孔酶標板，4℃放置過夜。
2. 第二天棄去包被液后，用PBST 洗刷3 次，每孔參加150 μl 1％ BSA 37℃關閉1 小時。
3. PBST 洗刷3 次后，每孔參加100 μl 不同倍比稀釋度的血清，并參加對照樣品，37℃孵育2 小時。
4. PBST 洗刷5 次后，參加100μl 稀釋后的HRP 符號的二抗，37℃孵育1 小時。
5. PBST 洗刷5 次后，顯色劑顯色20 min 后，酶標儀上讀取A405 吸收值。
二、包被細胞
1. 在96 孔培育板上接種細胞數(shù)為1 x 104 cells/well，37℃過夜培育。
2. 第二天用PBS 洗刷培育板2-3 次。
3. 參加125 μl/well 10% Forma lin（1:10 稀釋）, 室溫下固定15 min。
4. 用ddH2O 洗刷培育板3 次，并曬干，儲藏在2-8℃?zhèn)溆谩?/p>
5. 用PBST 洗刷3 次，每孔參加150 μl 1％ BSA 37℃關閉1 小時。
6. PBST 洗刷3 次后，每孔參加100 μl 不同倍比稀釋度的血清，并參加對照樣品，37℃孵育2 小時。
7. PBST 洗刷5 次后，參加100 μl 稀釋后的HRP 符號的二抗,37℃孵育1 小時。
8. PBST 洗刷5 次后，顯色劑顯色20 min 后，酶標儀上讀取A405 吸收值。50mM 的碳酸鹽包被緩沖液：0.05mol/L pH9.6 碳酸緩沖液,4℃，保存,Na2CO3 0.15 克, NaHCO3 0.293 克,蒸餾水稀釋至100 ml。
注：ABTS 作為底物進行顯色反應(10ml)：0.2M Na2HPO4 2.4ml；0.1M 檸檬酸2.6ml；ddH2O 5ml；ABTS 5mg；H2O2(30%) 4 ul（用前參加）。
注意事項：血清標本宜在新鮮時檢測。如有細菌污染，菌體中可能含有內源性HRP，也會產生假陽性反應。如在冰箱中保存過久，其中的可發(fā)生聚合，在間接法ELISA中可使本底加深。一般說來，在5天內測定的血清標本可放置于4℃，超過一周測定的需低溫冰存。凍結血清融解后，蛋白質部分濃縮，分布不均，應充分混勻宜輕緩，防止氣泡，可上下顛倒混和，不要在混勻器上強烈振蕩。混濁或有沉淀的血清標本應先離心或過濾，澄清后再檢測。反復凍融會使抗體效價下跌，所以測抗體的血清標本如需保存作多次檢測，宜少數(shù)分裝冰存。保存血清自采集時就應注意無菌操作，也可參加適當防腐劑。
希望以上文章能協(xié)助大家了解現(xiàn)在研究進展及我們的ELISA試劑盒核心技術，歡迎各位教師聯(lián)絡我們咨詢、提出意見，愿我們的盡力成果與您的科研碰撞出不一樣的火花！
