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豐壽講堂：操作細(xì)胞復(fù)蘇應(yīng)該留心哪些！

閱讀：233發(fā)布時間：2020-1-9

初學(xué)者操作細(xì)胞復(fù)蘇時易犯錯誤：

1. 水浴鍋未預(yù)熱或許未預(yù)熱到37℃。

2. 水浴鍋內(nèi)凍存管太多，導(dǎo)致傳熱欠安，使融化時間延伸。?
3. 離心前遺忘平衡，導(dǎo)致離心機損壞和細(xì)胞丟失。

4. 次復(fù)蘇細(xì)胞過多，遺忘替換吸頭和吸管，導(dǎo)致細(xì)胞穿插污染。

【留心事項】

1. 取細(xì)胞的進(jìn)程中留心帶好防凍手套，護(hù)目鏡。細(xì)胞凍存管或許漏入液氮，凍住時凍存管中的氣溫急劇上升，可導(dǎo)致爆破。

2. 常溫下二甲基亞砜對細(xì)胞的副作用較大，因而，必須在1-2 min內(nèi)使凍存液*融化。假設(shè)復(fù)蘇溫度太低，會構(gòu)成細(xì)胞的危害，所以挑選40℃復(fù)蘇。

3. 貼壁細(xì)胞復(fù)蘇實驗規(guī)范流程是將凍住后的細(xì)胞懸液行離心，以去除冷凍維護(hù)液DMSO對細(xì)胞的危害，但是離心也會對剛復(fù)蘇的狀況欠佳的細(xì)胞發(fā)作危害。

【操作留心】

1.可以提前把需求的體積的培養(yǎng)液放到培養(yǎng)瓶里，擰松瓶蓋，放到孵箱里半小時到1小時，這樣溫度和ph值都已經(jīng)適合細(xì)胞生長了。

2.為防止凍存管在升溫時爆裂等，可以在放入水浴前就實現(xiàn)在超凈臺里把蓋子擰松一下然后再擰上。從液氮罐里拿出來不是說一定要爭分奪秒地放入水浴。

3.水浴溫度40C應(yīng)該也沒問題，但正規(guī)的protocol上歷來都只說37C。橫豎應(yīng)該相差不大，但不能太高了。另外，不必等細(xì)胞全化了再從水浴里取出來。只需冰塊浮起來了就差不多了


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