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技術(shù)文章

國產(chǎn)elisa試劑盒在操作時的問題分析

閱讀：89發(fā)布時間：2019-12-18

1.樣品稀釋
酶聯(lián)免疫反響是一種敏感性很高的反響，如果血清不稀釋，不行避免會發(fā)生很強的非特異性反響，出現(xiàn)假陽性。因而，國外檢測血清抗體的試劑盒，均規(guī)定將血清稀釋至恰當?shù)谋稊?shù)，以下降非特異性反響，使特異性的抗原抗體反響充沛體現(xiàn)出來。
2.試劑盒平衡
試劑盒中一切試劑和板條均應(yīng)在實驗前平衡至室溫（約25℃），一般需在室溫放置20-30分鐘以上。平衡時刻太短會形成試劑混勻不夠，樣品孵育時刻相對縮短，ELISA反響不夠充沛。冬季室溫低，可將試劑盒置37℃溫箱20分鐘。
3.樣品和試劑的混勻
稀釋前、后的樣品有必要充沛混勻，一切試劑在加樣前也須搖勻，以保證實驗的均一性。
4.加樣
在現(xiàn)在的ELISA商品試劑盒中，必定有運用微量加樣器加入樣本的步驟。注意的要害點是：加樣不行太快，要避免加在孔壁上部，不行濺起和發(fā)生氣泡。加樣太快，無法保證微量加樣的準確性和均一性。加在孔壁上部的非包被區(qū)，易導(dǎo)致非特異吸附。濺起會對鄰近孔發(fā)生污染。出現(xiàn)氣泡則反響液界面有差異。所以，有時候一份標本用相同的試劑盒這次測定為陽性，下次測定為陰性，往往就是上述加樣及試劑的錯誤所致。
5.溫育
溫育是ELISA測定中影響測定勝敗為要害的一個要素。ELISA作為一種固相免疫測定，抗原抗體的結(jié)合反響在固相上進行，要使液相中的抗原或抗體與固相上的特異抗體或抗原*結(jié)合，有必要在必定的溫度條件下反響必定的時刻。溫育所需時刻與溫度成反比，即溫度越高，則所需時刻相對較短。


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