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豐壽詳談:ELISA檢測(cè)試驗(yàn)三步到位

閱讀:127發(fā)布時(shí)間:2019-12-13

1、包被原的性質(zhì):

①親和素*:先親和素先包被載體,參加*化的DNA,這種包被辦法均勻、結(jié)實(shí),已擴(kuò)展應(yīng)用于各種抗原物質(zhì)的定量測(cè)定。
②脂類物質(zhì):可將其在有機(jī)溶劑(例如乙醇)中溶解后參加ELISA板孔中,開蓋置冰箱過夜或冷風(fēng)吹干,待酒精蒸發(fā)后,讓脂質(zhì)自然干固在固相表面。
③小分子:有必要依托和大的蛋白載體偶聯(lián)后才能固定在固相載體上。

2、ELISA試劑盒包被液的挑選:
一般挑選ph9.6的碳酸鹽緩沖液。但有時(shí)由于試驗(yàn)的需求,包被原的特殊性也可能選用中性的緩沖溶液來包。
應(yīng)留心以下原理:由于蛋白質(zhì)與聚苯乙烯固相載體是通過物理吸附結(jié)合的,靠的是蛋白質(zhì)分子結(jié)構(gòu)上的疏水基團(tuán)與固相載體表面的疏水基團(tuán)間的效果,這種物理吸附對(duì)錯(cuò)特異性的,受蛋白質(zhì)的分子量、等電點(diǎn)、濃度等的影響,大分子蛋白質(zhì)較小分子蛋白質(zhì)一般含有更多的疏水基團(tuán),故更易吸附到固相載體表面。

3、關(guān)閉:
繼包被之后用高濃度的無關(guān)蛋白質(zhì)溶液再包被的進(jìn)程。關(guān)閉便是讓許多不相關(guān)的蛋白質(zhì)充填這些空位,從而排斥ELISA后的進(jìn)程中攪擾物質(zhì)的再吸附。


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