細(xì)胞培養(yǎng)進(jìn)程中會(huì)呈現(xiàn)一些問題，比方：細(xì)胞無法在培養(yǎng)皿上貼壁生長(zhǎng)，細(xì)胞生長(zhǎng)緩慢。那么該怎么處理呢？
一、細(xì)胞無法在培養(yǎng)器皿上貼壁生長(zhǎng)
1.細(xì)胞*消化過度：縮短*消化時(shí)間或減少*用量。
2.支原體污染：隔絕細(xì)胞，檢測(cè)是否感染支原體；清洗通風(fēng)廚和培養(yǎng)箱，如細(xì)胞被污染，滅菌處理后丟掉。
3.培養(yǎng)基中無附著因子：如果運(yùn)用的是無血清配方，應(yīng)確保含有附著因子或許運(yùn)用通過包被的培養(yǎng)板。
二、細(xì)胞生長(zhǎng)緩慢
1.培養(yǎng)基或血清改動(dòng)：比較不同培養(yǎng)基配方中葡萄糖、氨基酸及其他成分有無差異；通過生長(zhǎng)實(shí)驗(yàn)比較新老批次血清有無差異；增大細(xì)胞初始接種密度；使細(xì)胞逐步適
應(yīng)新的培養(yǎng)基。
2.必需生長(zhǎng)促進(jìn)成分（如L-*或生長(zhǎng)因子）耗竭、短少或分化：去除原培養(yǎng)基，參加新鮮培養(yǎng)基；向培養(yǎng)基中增加生長(zhǎng)促進(jìn)成分（如L-*）。
3.輕度細(xì)菌或真菌污染：在不增加抗生素的條件下進(jìn)行培養(yǎng)，如細(xì)胞被污染，滅菌處理后丟掉。
4.時(shí)間存儲(chǔ)不妥：血清應(yīng)于-5℃至-20℃下貯存；培養(yǎng)基應(yīng)于2℃~8℃下避光貯存；盡量減少血清和培養(yǎng)基見光時(shí)間。
5.細(xì)胞初始接種密度低：增大活細(xì)胞接種密度。
6.細(xì)胞變老、老化：將老化細(xì)胞丟掉，取用代數(shù)較少的細(xì)胞。
7.支原體污染：隔絕細(xì)胞，檢測(cè)是否感染支原體；清洗通風(fēng)廚和培養(yǎng)箱，如細(xì)胞被污染，滅菌處理后丟掉。
三、懸浮細(xì)胞集成團(tuán)
1.存在鈣離子和鎂離子：用不含鈣離子和鎂離子的*清洗細(xì)胞，悄然吹打細(xì)胞，使其構(gòu)成單細(xì)胞懸液。
2.支原體污染：隔絕細(xì)胞，檢測(cè)是否感染支原體；清洗通風(fēng)廚和培養(yǎng)箱，如細(xì)胞被污染，滅菌處理后丟掉。
3.蛋白水解酶消化過度導(dǎo)致細(xì)胞裂解、DNA開釋：用0.001%DNA酶I處理細(xì)胞；用PBS沖刷后再接種到新培養(yǎng)基中。
四、培養(yǎng)基pH值改動(dòng)敏捷
1.培養(yǎng)箱CO2分壓設(shè)置過錯(cuò)：依據(jù)培養(yǎng)基中NaHCO3的濃度增大或下降培養(yǎng)箱CO2的分壓，NaHCO3濃度為2.0-3.7g/L時(shí)，應(yīng)相應(yīng)地運(yùn)用5%-10%的CO2分壓。
2.細(xì)胞培養(yǎng)瓶瓶蓋過緊：將瓶蓋旋松
會(huì)員1.png)