一、細(xì)胞傳代
1. 試驗(yàn)預(yù)備：200ul/1mlTip頭各一盒（以上物品均需高壓滅菌），酒精棉球，廢液缸，試管架，微量移液器，記號(hào)筆，培育皿，離心管。
?2. 棄掉培育皿中的培育基，用1ml的PBS溶液洗刷兩次。
3. 用Tip頭參加1ml Trypsin液，消化1分鐘（37℃，5%CO2 ）。用手輕拍培育瓶壁，觀察到細(xì)胞*從壁上脫落下來(lái)為止。
4. 參加1ml的含血清培育基停止反應(yīng)。
5. 用Tip頭多次吹吸，使細(xì)胞*分散開(kāi)。
6. 將培育液裝入離心管中，1000rpm離心5min。
7. 用培育液重懸細(xì)胞，細(xì)胞計(jì)數(shù)后挑選0.8X106個(gè)細(xì)胞參加一個(gè)35mm培育皿。
8. 將適宜體積*培育液參加離心管中，混勻細(xì)胞后輕輕參加培育皿中，使其均勻分布。
9. 將培育皿轉(zhuǎn)入CO2培育箱中培育，第二天轉(zhuǎn)染。
二、細(xì)胞轉(zhuǎn)染
1. 轉(zhuǎn)染試劑的預(yù)備
① 將400ul去核酸酶水參加管中，震動(dòng)10秒鐘，溶解脂狀物。
② 震動(dòng)后將試劑放在－20攝氏度保存，使用前還需震動(dòng)。
2. 挑選適宜的混合份額（1：1－1：2/脂質(zhì)體體積：DNA質(zhì)量）來(lái)轉(zhuǎn)染細(xì)胞。在一個(gè)轉(zhuǎn)染管中參加適宜體積的無(wú)血清培育基。參加適宜質(zhì)量的MyoD或者EGFP的DNA，震動(dòng)后在參加適宜體積的轉(zhuǎn)染試劑，再次震動(dòng)。
3. 將混合液在室溫放置10―15分鐘。
4. 吸去培育板中的培育基，用PBS或者無(wú)血清培育基清洗一次。
5. 參加混合液，將細(xì)胞放回培育箱中培育一個(gè)小時(shí)。
6. 到時(shí)后，依據(jù)細(xì)胞品種決定是否移除混合液，之后參加*培育基持續(xù)培育24－48小時(shí)。
三、第二次細(xì)胞傳代
1. 在轉(zhuǎn)染后24小時(shí)，觀察試驗(yàn)結(jié)果并記錄綠色熒光蛋白表達(dá)情況。
2. 再次進(jìn)行細(xì)胞傳代，依照免疫染色適宜的密度0.8X105個(gè)細(xì)胞/35mm培育皿將細(xì)胞重新轉(zhuǎn)
入培育皿中。
3. 在正常條件下培育24小時(shí)后依照染色要求條件固定。
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