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技術(shù)文章

今日課堂:在操作時ELISA試劑盒常見問題!

閱讀:96發(fā)布時間:2019-11-21

1.一次ELISA實驗需求多長時間?
雙抗體夾心ELISA法一次實驗需求3.5-4小時,競爭ELISA法一次實驗需求2-2.5小時。


2.用什么軟件處理ELISA檢測的數(shù)據(jù)比較好?
ELISA規(guī)范曲線擬合能夠運用Curve Expert軟件進行數(shù)據(jù)分析。它運用十分方便,能夠生成漂亮的曲線運用到論文之中。軟件能夠在下載中心進行下載。
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3.血漿樣本怎么處理?
建議選擇EDTA或許檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,于1000×g離心15分鐘,細心搜集上清。保存過程中如有沉積構(gòu)成,應(yīng)再次離心。

4.細胞上清液樣本怎么處理?
檢測分泌性的成份時,用無菌管搜集。離心20分鐘左右(1000×g)。細心搜集上清。


5.血清樣本怎么處理?

全血標本于室溫放置2小時或4℃過夜后于1000×g離心20分鐘。細心搜集上清。保存過程中如有沉積構(gòu)成,應(yīng)再次離心。

 

6.為什么有的試劑盒是采用競爭ELISA法?

小分子抗原或半抗原由于缺少可作夾心法的兩個以上的位點,因此不能用雙抗體夾心法進行測定,能夠采用競爭法。其原理是標本中的抗原和固相載體上的抗原競爭*化抗體上的結(jié)合位點,標本中抗原量含量愈多,結(jié)合在固相上的*化抗體愈少,*后的顯色也愈淺,即顯色深淺與樣本中的抗原濃度成反比。小分子激素等ELISA測定多用此法。

 

7.細胞裂解液樣本怎么處理?
檢測細胞內(nèi)的成份時,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,細胞濃度達到100萬/ml左右。通過重復(fù)凍融或許超聲破碎,以使細胞損壞并放出細胞內(nèi)成份。離心10分鐘左右(5000×g)。細心搜集上清。保存過程中如有沉積構(gòu)成,應(yīng)再次離心。

 

8.安排樣本怎么處理?
用預(yù)冷的PSB (0.01M,pH=7.4)沖刷安排,以去除殘留血液(勻漿中裂解的紅細胞會影響測量成果),稱重后將安排剪碎。將剪碎的安排與對應(yīng)體積的PBS(一般按1:9的重量體積比,比如1g的安排樣本對應(yīng)9mL的PBS,詳細體積可根據(jù)實驗需求適當調(diào)整,并做好記載。推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑)加入玻璃勻漿器中,于冰上充分研磨。為了進一步裂解安排細胞,能夠?qū)驖{液進行超聲破碎,或重復(fù)凍融。后將勻漿液于5000×g 離心5~10分鐘,取上清檢測。


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