檢測(cè)任何目的靶蛋白都有不止一種抗體可供挑選，為縮小抗體的挑選范圍選中合適的抗體，需求考慮如下幾種因素：
1. 剖析或運(yùn)用的類(lèi)型
一般抗體說(shuō)明書(shū)都列出該抗體經(jīng)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證過(guò)適用于何種剖析類(lèi)型，如：能夠運(yùn)用于 WB IHC ICC ELASA 剖析等，假如抗體說(shuō)明書(shū)沒(méi)有提及的運(yùn)用類(lèi)型，并不意味著該抗體不適用于此種剖析運(yùn)用類(lèi)型，而僅是說(shuō)明沒(méi)有經(jīng)過(guò)此種剖析實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，假如抗體不適用某些剖析實(shí)驗(yàn)，則會(huì)在抗體說(shuō)明書(shū)上標(biāo)注出來(lái)不適于某剖析實(shí)驗(yàn)。
2. 樣本蛋白的結(jié)構(gòu)性質(zhì)
了解樣本蛋白的結(jié)構(gòu)性質(zhì)有助于挑選合適的抗體，至少兩方面因素需求考慮待測(cè)樣本蛋白的結(jié)構(gòu)域：抗體是由各種不同免疫原免疫宿主而制備得來(lái)，其間的免疫原包括：全長(zhǎng)蛋白、蛋白片斷、多肽、全有機(jī)體或細(xì)胞，抗體說(shuō)明書(shū)一般都有免疫原的描繪，假如計(jì)劃?rùn)z測(cè)的是蛋白片斷或一種特別的同型物或蛋白全長(zhǎng)的某一區(qū)域，則必須挑選用含此片段域的免疫原制備出的抗體。
3. 樣本的物種
應(yīng)挑選物種相同或有穿插反響的抗體，抗體可能與不同物種的同種靶蛋白有穿插反響，因其氨基酸序列同源性較高，假如樣本的種類(lèi)未列入抗體說(shuō)明書(shū)上的穿插反響種屬表中，并不意味著該抗體不適用于檢測(cè)該物種的蛋白，而只是表明該物種沒(méi)有用此抗體檢測(cè)驗(yàn)證過(guò)，應(yīng)通過(guò)序列比對(duì)的方法來(lái)預(yù)測(cè)穿插反響，可運(yùn)用 Expasy 和 NCBI BLAST 來(lái)進(jìn)行不同物種蛋白同源性比對(duì)。
4. 抗體宿主的種類(lèi)
一抗的挑選
一般說(shuō)來(lái)，在運(yùn)用偶聯(lián)二抗結(jié)合無(wú)偶聯(lián)物的一抗時(shí)，一抗宿主動(dòng)物的物種挑選較為重要，對(duì)于免疫組化而言，盡可能挑選與樣本不同種系物種的一抗，然后防止二抗與樣本內(nèi)源性免疫球蛋白發(fā)生穿插反響，例如：檢測(cè)小鼠樣本蛋白，則不應(yīng)挑選小鼠或大鼠源的一抗，選兔源的一抗，則二抗則可挑選偶聯(lián)了檢測(cè)分子的抗兔 IgG。
二抗的挑選
二抗應(yīng)選用與運(yùn)用的一抗相同的物種來(lái)歷，例如：假如你的一抗是小鼠的單克隆抗體，二抗則選抗小鼠的二抗 anti-mouse secondary 。主張檢查二抗說(shuō)明書(shū)確保該抗體適用于你的檢測(cè)運(yùn)用， 二抗一般連接熒光素 FITC 或發(fā)光團(tuán)。
雙重染色抗體的挑選
雙重染色抗體的挑選用未偶聯(lián)一抗進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)物或安排切片的雙重免疫染色要求一抗來(lái)歷于不同物種并且二抗別離辨認(rèn)其間之一，二抗說(shuō)明書(shū)應(yīng)描繪其與其它物種來(lái)歷的免疫球蛋有否有穿插吸附。
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