ELISA試劑盒的正確選購(gòu)與運(yùn)用尤為重要。尤為是關(guān)于新手而言，掌握ELISA試劑盒的選購(gòu)與運(yùn)用方面的知識(shí)更為重要。
一、ELISA試劑盒選購(gòu)技巧
試劑盒的應(yīng)用種屬、檢測(cè)樣本的品種：除試劑盒特別闡明外，一般不同種屬不能通用。常見(jiàn)待測(cè)樣本品種有：血清和血漿（不同抗凝劑），細(xì)胞上清，和細(xì)胞裂解液，試劑盒中不同樣本的稀釋液不混用；
試劑盒的檢測(cè)規(guī)模：也便是標(biāo)曲規(guī)模，要留意待測(cè)樣本濃度是否落在標(biāo)曲規(guī)模內(nèi)，關(guān)于濃度很高的樣本，能夠*行預(yù)實(shí)驗(yàn)摸索到比較好的稀釋倍數(shù)后再大量測(cè)定樣本。
二：ELISA試劑盒中的稀釋線性及回收率：
a、稀釋線性一般指樣本稀釋線性，是將樣本梯度稀釋下來(lái)，看各稀釋梯度濃度是否成線性；參閱樣本稀釋線性能夠挑選樣本的較佳稀釋倍數(shù)；
b、稀釋線性也有做加標(biāo)稀釋線性的情況，加標(biāo)稀釋線性是將規(guī)范品參加樣本中測(cè)定參加的規(guī)范品濃度測(cè)定是否準(zhǔn)確；同樣也是確定待測(cè)樣本稀釋倍數(shù)的參閱目標(biāo)。一般線性和回收率的規(guī)模在80%-120%比較適宜；
三：ELISA試劑盒的其它目標(biāo)：
a、靈敏度：試劑盒能夠檢測(cè)到的樣本低濃度的才能，假如待檢目標(biāo)含量很低，需求挑選高靈敏度的ELISA試劑盒；
b、板間和板內(nèi)的變異系數(shù)（CV%）:反映板內(nèi)和不同板之間是否均勻，CV%一般小于10% 比較好。
c、試劑盒的有效期：試劑盒的有效期一般是半年至一年，樣本預(yù)備時(shí)刻需求考慮到試劑盒的有效期。
四、ELISA試劑盒運(yùn)用技巧
樣本的預(yù)備：盡量運(yùn)用新鮮樣本，不運(yùn)用有溶血，被細(xì)菌污染、標(biāo)本保存時(shí)刻過(guò)長(zhǎng)和標(biāo)本凝固不全的樣本。ELISA檢測(cè)宜收集新鮮標(biāo)本，如不能當(dāng)即測(cè)定，5天之內(nèi)應(yīng)4℃保存，關(guān)于1周后檢測(cè)的樣本應(yīng)低溫凍存；做好分裝，長(zhǎng)期凍存的樣本避免重復(fù)凍融。
仔細(xì)閱讀闡明書(shū)，了解整個(gè)流程，引薦畫(huà)出扼要步驟圖；提前預(yù)備試劑，比方常見(jiàn)20X洗滌液是濃縮液，需求用超純水提前稀釋預(yù)備好。一般的檢測(cè)抗體和酶標(biāo)二抗需求用對(duì)應(yīng)的稀釋液稀釋至工作濃度。不同批次的試劑不要混用，查看各組分的有效期。
預(yù)包被的酶標(biāo)板條和各試劑組份需求室溫平衡30 min以上，這樣做的意圖能使反響微孔內(nèi)的溫度較快地達(dá)到所需溫度，預(yù)防后續(xù)實(shí)驗(yàn)中因?yàn)榉跤郎囟然蚴菚r(shí)刻不夠充沛，而將一些弱陽(yáng)性樣本不能檢出。
待測(cè)樣本加樣：待檢樣本過(guò)多時(shí)，建議分批操作；需求稀釋的樣本提前做好稀釋，留意選對(duì)適宜稀釋液；控制好加樣時(shí)刻，避免加樣費(fèi)時(shí)過(guò)長(zhǎng)造成差錯(cuò)；留意加樣視點(diǎn)，筆直參加孔底，不要接觸孔壁, 做到一份樣本一個(gè)移液頭，避免交叉污染。
五：ELISA試劑盒溫育和洗板
溫育時(shí)刻和溫度一般依據(jù)試劑盒的闡明書(shū)進(jìn)行挑選。溫育時(shí)能夠選用水浴或許濕盒孵育,避免“邊緣效應(yīng)”。
①手工洗板時(shí)，決定時(shí)要筆直，避免交叉污染，用力不能過(guò)猛，避免抗原抗體復(fù)合物脫離；
②洗板機(jī)洗板時(shí)應(yīng)常常查看沖洗頭是否通暢。
顯色：市售ELISA試劑盒中，一般是以四甲基聯(lián)苯胺(TMB)為底物的顯色液，反響條件為37℃或室溫反響15～30 min。顯色反響需求避光。
讀數(shù)和數(shù)據(jù)剖析：終止后讀取結(jié)果盡量在15min內(nèi)完成，讀取OD值時(shí)酶標(biāo)儀需先預(yù)熱15～30 min再進(jìn)行。數(shù)據(jù)剖析一般用四參數(shù)和直線擬合法，挑選哪種擬合方式，能夠依據(jù)標(biāo)曲的相關(guān)系數(shù)（R2）來(lái)確定，R2一般需求大于0.99。
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