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技術(shù)文章

ELISA實驗辦法之競爭法檢測抗原

閱讀：1257發(fā)布時間：2019-7-16

競爭法檢測抗原
    
當小分子抗原或半抗原因缺乏可作夾心法的兩個以上的抗體結(jié)合位點，因而不能用雙抗體夾心法進行測定，能夠采用競爭法形式。經(jīng)洗刷后分紅兩組：一組加酶符號抗原和被測抗原的混合液，而另一組只加酶符號抗原，再經(jīng)孵育洗刷后加底物顯色，這兩組底物降解量之差，即為所要測定的不知道抗原的量。小分子激素、藥物等ELISA測定多用此法。
   
競爭法的扼要操作過程：
    
1）先參加抗體，使抗體固定結(jié)合于載體表面；
   
2）參加梯度濃度份額的待測樣品與酶標抗原混合物,同時做只加酶標抗原的對照組；
   
3）參加酶促反響底物，發(fā)作顯色反響，對比實驗組及對照組的顯色差異，計算不知道抗原的量。
    
雙抗原夾心法檢測抗體
    
雙抗原夾心法的反響形式與雙抗體夾心法相似。用特異性抗原進行包被和制備酶結(jié)合物，以檢測相應(yīng)的抗體。與間接法測抗體的不同之處為以酶標抗原替代酶標抗抗體。此法中受檢標本不需稀釋，可直接用于測定，因而其敏感度相對高于間接法。乙肝標志物中抗HBs的檢測常采用本法。本法關(guān)鍵在于酶標抗原的制備，應(yīng)根據(jù)抗原結(jié)構(gòu)的不同，尋找適宜的符號辦法。
    
雙抗原夾心法的扼要操作過程為：
   
1）先參加抗原，使抗體固定結(jié)合于載體表面；
    
2）再加樣品，使方針檢測抗體構(gòu)成抗原-抗體復合物；
    
3）加酶標抗原；
    
4）參加酶促反響底物，發(fā)作顯色反響，顯色的深淺與待測抗體的量成正比。


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